开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究内容
本课题从肺转移骨肉瘤细胞培养上清液中提取外泌体，为研究高肺转移骨肉瘤的发病、转移机制及免疫治疗提供新的切入点。
- 选题意义
骨肉瘤是一种起源于间叶组织的原发性恶性骨肿瘤，以生长发育旺盛的儿童及青年高发。虽然近年骨肉瘤原发瘤的诊断治疗取得了较大进展，但肺转移始终是影响远期疗效难以改善的障碍。这种高风险的肺转移发生率成为骨肉瘤治疗的瓶颈。目前临床上对恶性肿瘤患者主要的治疗途径包括化疗、放疗和手术切除，其中化疗是最常用的治疗方式。大多数抗肿瘤药物的作用机理是针对代谢旺盛、增殖较快的细胞产生杀伤作用，这些药物发挥药效时需要很高的血药浓度，但是由于化疗药物的选择性较差，对正常组织细胞也具有一定的杀伤作用，会产生明显的毒副作用。为了降低抗癌药物的毒副作用，各种各样的载体就成为了研究者研究的重点。外泌体由活细胞分泌，由各种细胞产生的囊泡样结构，包含蛋白质、脂质、遗传物质如mＲNA、miＲNA等，能参与到肿瘤的发生、发展、侵袭、转移中，以外泌体为载体运输抗癌药物可以明显降低免疫原性，因此外泌体有望成为良好的药物载体；外泌体对于肿瘤的早期诊断、治疗、预后检测均有重要的作用。
- 研究手段
采用超速离心的方法从高肺转移骨肉瘤细胞培养上清液中分离外泌体，利用透射电子显微镜鉴定外泌体。
四、文献综述
近年来，关于外泌体调控肿瘤发病机制的研究取得了显著的成果，越来越多的研究表明外泌体参与物质运输，还携带和传递重要的生物信息，在介导免疫抗原递呈、树突状细胞的活化、神经退行性疾病发生、肿瘤细胞抗原的转移及肿瘤诊断治疗中发挥重要作用；同时，肿瘤细胞能以分泌外泌体的形式封装排泄抗肿瘤药物，从而产生耐药性。针对外泌体的检测与分析不仅可以辅助肿瘤的早期诊断，指导治疗及评估预后，外泌体本身及其修饰加工产物还可以作为基因制剂或药物的有效载体用于肿瘤的治疗。外泌体的提取纯化、鉴定是首要的步骤，也是一切后续实验的基础。
1.外泌体的介绍
泌体最早被发现于网织红细胞上清液中，呈囊泡样结构。很多细胞都可以分泌外泌体，如血细胞、树突状细胞、内皮细胞、神经细胞、肿瘤细胞等，外泌体被认为是细胞间进行交流、交换信息的重要介质，这也是它能影响肿瘤生长的重要生物学基础，外泌体含有蛋白、脂类物质，遗传物质如mＲNA、microＲNA、DNA片段等。肿瘤细胞分泌的外泌体参与肿瘤发展的多个方面，包括肿瘤的侵袭、逃避免疫监视、肿瘤的转移、调节肿瘤生长微环境等；外泌体的提取和纯化的方法主要包括差速离心联合蔗糖密度梯度离心法、超滤密度梯度离心、免疫磁珠提取法和ExoQuick Precipitation提取法，主要依据外泌体理化特性进行分离和提纯。
2.肿瘤外泌体在肿瘤转移中发挥重要作用
2.1决定肿瘤转移方向
