开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究内容
本课题应用 CCK-8 法、流式细胞术、细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 三阴乳腺癌细胞增殖、周期分布、凋亡、体外迁移能力和细胞内活性氧（ROS）的影响。
- 选题意义
'三阴乳腺癌（TNBC）'特指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人表皮生长因子受体2(HER-2)均阴性的乳腺癌患者。按分子分型，乳腺癌分为:luminal型、HER-2( )型和Basal-like型。Basal-like型分子表达为ER(-)/PR(-)/HER-2(-)，相当于三阴乳腺癌，特征为基底上皮分子标志物高表达(CK5/6或17，EGFR)以及ER或ER相关基因及HER-2或HER-2相关基因低表达。本型乳腺癌5年生存率不到80%，多见于绝经前年轻患者，内脏转移、脑转移几率较高，病理组织学分级较差，多为3级，细胞增殖比例较高，且多伴p53突变，c-kit、p53、EGFR表达多为阳性，基底细胞标志物CK5/6、CK17也多为阳性。肿瘤侵袭性强，相对易发生局部复发及远处转移，与基底细胞样乳腺癌和BRCA1基因突变相关性乳腺癌有较多相似特征。三阴乳腺癌的预后与肿瘤大小和淋巴结状况关系不大，复发迅速，局部复发率无显著性差异, 远处转移发生率高于非三阴乳腺癌, 主要表现肺转移和肝转移的发生率高,而骨及脑转移的发生率无显著性差异。目前临床治疗中, TNBC对内分泌治疗及分子靶向治疗并不敏感, 基本无法从中获益。因此优化目前临床使用的治疗手段、寻找新的有效治疗方法成为当前的研究热点。
- 研究手段
应用 CCK-8 法、流式细胞术、细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 三阴乳腺癌细胞增殖、周期分布、凋亡、体外迁移能力和细胞内活性氧（ROS）的影响。
四、文献综述
去氧鬼臼毒素（DPT）及其注射剂作为具有自主知识产权的国家Ⅰ类抗肿瘤新药，由中国药科大学医药化工研究所朱雄、吴葆金研究员负责研发经过长达八年的艰苦努力，现已经获得CFDA颁发的Ⅰ ～ Ⅲ期药物临床研究批件。临床前研究表明， 体外实验下DPT对多种人源性肿瘤细胞有很强的杀伤作用，具有强抗肿瘤活性。体内研究表明，DPT 对非小细胞肺癌、乳腺癌和胃癌等实体瘤有效，与紫杉醇的抗肿瘤活性相当或更好，尤其对耐紫杉醇和长春瑞滨的瘤株有效。肿瘤的耐药性是肿瘤化疗中普遍存在的棘手问题，而 DPT 对耐药肿瘤株有效，有望成为临床上治疗耐药肿瘤患者的新药。
1.去氧鬼臼毒素的介绍
富含木脂素类化合物具抗肿瘤作用，按照结构类型归类，木脂素类化合物包括芳基萘、二苄基丁内酯、四氢呋喃、二节基丁烷和联苯环辛烯等。其中芳基萘最具代表性，研究最多的为鬼臼毒素类化合物，其结构特征为包含 1 个与四氢萘环 2，3 位骈和的 gamma;-丁内酯环。该类化合物的研究始于盾叶鬼臼中获得具有抗肿瘤活性的鬼臼毒素。鬼臼毒素由于有效的抗癌特性在木脂素类化合物中占有非常重要的地位[1]。而去氧鬼臼毒素是一个自然存在的鬼臼毒素衍生物，同样能够与微管蛋白结合，将细胞阻滞于G2/M 期，抑制多种肿瘤细胞的增殖，具有抗肿瘤活性。已有实验室可以成功半合成去氧鬼臼毒素。
2.去氧鬼臼毒素的结构特征
鬼臼毒素的化学结构在 80 年前已阐明（Fig1）。此类化合物含有一个五环系统（如图所示：A、B、C、D、E 环）。所有鬼臼毒素类的共同结构特征：①A、B、C、D 四环几乎在同一平面内转运；②芳香环 E 具有一定程度自由旋转能力；③具有四个相邻的非对称中心；④C4 位有特殊的立体化学特征，为决定化合物是否与微管蛋白具有亲和力的关键。不同研究表明 A 环和 E 环是鬼臼毒素活性不可缺少的部分。此外，C 环 C4 位的修饰大多可以接受，而且此位置的基团修饰可以增强鬼臼毒素的抗癌活性；自由旋转的 E 环也是鬼臼毒素发挥抗肿瘤活性所必需的。鬼臼毒素的毒性较大，水溶性差，但是由于具有鬼臼毒素毒素进行了多方面的修饰。显著的生物活性，鬼臼毒素及其衍生物已成为以结构修饰为主要手段的新型抗肿瘤药物开发的重要化合物，对其的结构修饰主要包含以下几个方面：①在 C环 4 位上的修饰，鬼臼毒素衍生物 C 环的 4 位碳原子一般为beta; 构型，这主要是整个分子的立体结构所致。由于庞大的 E 环处于 alpha; 位，它造成的空间位阻很大，使亲核试剂从 C 环上位阻小的一侧进攻，即与 C-1alpha; 位的 E 环成反式进攻，生成 C-4beta;构型的产物。国外研究人员据此合成了以 VP-16 （Fig.1）和VM-26 为代表的 C 环上 4beta; 位侧链为糖基的衍生物；②对于A 环和 D 环的修饰，研究表明这种结构的改变一般情况是导致它的活性降低，此类报道比较少；③其他方面的修饰，如 1位未关环衍生物合成，侧链含有鬼臼毒素的高分子抗癌药物合成等。
