开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一．国内外研究概况
众所周知，我国是中药大国，不仅表现在中药材种类和数量繁多，而且用药历史悠久。中药丹参是我国传统的常用中药材之一，最早记载于东汉《神农本草经》中，被列为上品。药材来源于唇形科鼠尾草属多年生直立草本植物丹参( Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎，因其表面颜色呈红而得名为“丹参”或“赤参”[1]。丹参植株多分枝，全株密被腺毛和长柔毛；奇数羽状复叶；根圆柱形，肉质，表面砖红色，内部乳白色。丹参对土壤和气候适应性较强，山坡、草丛、沟边、林缘等阳光充足且较湿润的地方都可看见丹参的身影，主要分布于甘肃、山东、江苏、辽宁、河北、山西等省区[2]。据古书记载，丹参具有活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦、养血安神的功效[3]。现代医学研究表明，丹参所含的有效成分主要分为两大类，即脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类，脂溶性成分包括丹参酮I、丹参酮ⅡA、隐丹参酮等，水溶性成分包括丹酚酸A、丹酚酸B、丹参素等[4]。据实验研究表明，脂溶性丹参酮类成分的药理作用主要以改善血液循环、抗肿瘤和抑菌消炎为主，水溶性的丹酚酸类成分则以抗氧化、抗凝血、抗血栓形成、调血脂和细胞保护作用为主[5]。所以丹参临床应用于治疗心血管疾病、消化系统疾病、恶性肿瘤等[6]。
1.1不同外植体对愈伤组织诱导的影响
丹参组织培养最常用的是MS培养基。田宇红等人首先将丹参种子接种在MS培养基上以获得无菌苗，随后以无菌苗叶片和茎作为外植体接种，结论为茎段是诱导愈伤组织的最佳外植体[7]。周伟在其研究中同样以丹参种子作为材料接种在1/2MS培养基上获得无菌苗，随后以丹参无菌苗叶片为外植体，将其分成叶柄、远离叶片的基部、靠近叶片的基部三个部分，分别接种在含1.0mg/L6-BA与0.5mg/L 2，4-D的MS培养基上，研究叶的不同部位对丹参愈伤组织诱导的影响，实验结论是不同外植体对丹参愈伤组织诱导率没有明显影响，但对愈伤组织生长势有明显影响，其中叶柄诱导的愈伤组织生长势最佳，靠近叶片的基部次之，远离叶片的基部最差[8]。亓翠英等人以白花丹参叶为外植体，经消毒后将其分为叶顶、不带叶柄叶基部和带叶柄叶基部3个部位，分别接种于附加了2.0mg/L6-BA和1.0mg/LNAA的MS培养基上，得出外植体品种不同，愈伤组织诱导率差异显著的结论[9]。
1.2不同浓度激素对愈伤组织诱导的影响
冯玲玲以丹参叶片、幼茎和叶柄为外植体，对不同植物生长调节物质诱导愈伤组织进行研究，结果显示0.5mg/L 2，4-D和1.0mg/L6-BA组合的MS培养基为愈伤组织诱导的最佳培养基[10]。孟倩的研究中首先将丹参幼嫩茎节接种在含0.5mg/LNAA 和2.0mg/L6-BA的MS培养基上获得无菌苗，其次以无菌苗的幼嫩叶片作为外植体，接种于附加了不同植物生长调节剂的MS培养基上，实验结果表明愈伤组织诱导的最适培养基是MS 0.5mg/L 2，4-D 1.0mg/L6-BA[11]。孟倩等人取丹参带腋芽的幼嫩茎段为材料，接种于附加了0.5mg/ LNAA 和1.0mg/L6-BA的MS培养基上获得无菌苗，随后以无菌苗叶片为外植体，将其接种于含有不同植物生长调节剂的MS培养基上进行愈伤组织诱导，实验结果显示任何激素对叶片诱导出愈伤组织都有促进作用，但综合考虑后愈伤组织诱导的最佳培养基是含0.5mg/L 2，4-D和1.0mg/L6-BA的MS培养基 [12]。
彭绍峰等人以丹参无菌苗幼嫩叶片作为外植体，接种于附加不同浓度激素的MS培养基上，最后得出含0.5mg/L 2，4-D与1.0mg/L6-BA组合的MS培养基是愈伤组织诱导最佳培养基[13]。兰英等人以不同地理种源盆栽丹参的茎尖嫩叶为材料，先后用70%乙醇和2%次氯酸钠溶液进行灭菌处理以获得无菌外植体，将其背接于附加了不同浓度激素配比的MS培养基上，最终结果表明诱导愈伤组织的最佳激素组合为2.0mg/L6-BA 1.0mg/LNAA，而6-BA与 2，4-D搭配使用时，2，4-D可能会使愈伤组织中的多酚氧化酶活性升高，或对外植体具有毒害作用，导致外植体未明显长大且褐化严重[14]。刘慧敏等人直接以丹参愈伤组织为外植体，研究激素种类对愈伤组织生长速度的影响，实验结果表明含0.5mg/L6-BA 、1.0mg/L 2，4-D与100mg/LVc的MS培养基对愈伤组织生长最好[15]。
1.3外植体和激素配比对愈伤组织诱导的影响
在柳福智对丹参愈伤组织诱导的研究中，将天士力的丹参种子接种在1/2MS培养基上获得无菌苗，以无菌苗的茎、叶和根作为外植体，分别接种于附加1.0mg/L6-BA 、1.0mg/L 2，4-D与1.0mg/LNAA的MS培养基上，统计出愈率，随后将丹参外植体接种于附加不同激素的MS培养基上，统计出愈率，实验结果表明茎和叶均是诱导愈伤组织的最佳外植体，而诱导愈伤组织的最佳激素组合为两种：2.0mg/L 2，4-D 1.0mg/L6-BA和1.0mg/L6-BA 1.0mg/L 2，4-D 1.0mg/LNAA[16]。赵东利等人为了研究不同激素组合和不同外植体对愈伤组织诱导的影响，以辽宁丹参的幼嫩叶片、幼茎及花蕾为外植体，分别接种于含不同浓度激素的MS培养基上，并且以不添加任何激素的MS培养基作对照，观察愈伤组织的诱导情况，最终结果表明3种外植体中嫩茎最适合用于愈伤组织诱导，0.5mg/L 2，4-D与0.5mg/L6-BA组合的MS培养基为愈伤组织诱导的最佳培养基[17]。徐娜等人以无芽嫩茎、叶片及叶柄为外植体，分别接种于3种不同激素配比的MS培养基上，实验结果表明愈伤组织诱导的理想材料是嫩茎，与赵东利等人的研究相符，而愈伤组织诱导的最佳培养基为含2.0mg/L 2，4-D、0.3mg/L6-BA以及0.8mg/LNAA的MS培养基[18]。
1.4愈伤组织含量测定
