复方板蓝根颗粒原方收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂 [S] 第十二册,标准编号为WS3-B-237797),制剂处方组成为板蓝根和大青叶,具有清热、解毒、凉血等功效,是临床上大宗、常用药,广泛用于风热感冒、瘟病发热、咽喉肿烂、出斑、流行性乙型脑炎、腮腺炎以及肝炎等疾病的治疗[1]。
该制剂的提取物具有多种药理活性,其抗病活性是多组分、多靶点、多方向、多途径、多层次综合作用的结果,然而《中华人民共和国卫生部药品标准》中所载质量标准仅采用滤纸显色反应和试管茚三酮显色反应鉴别,没有明确的薄层鉴别及含量测定方法。
鉴于现行标准的专属性差,有文献以复方板蓝根颗粒制剂中靛蓝和靛玉红这两种成分含量(高效液相色谱法、双波长分光光度法及薄层扫描法测定)为其质量评价指标[2-4],但是靛蓝与靛玉红在该制剂中的含量并不能真实地反应该制剂在临床应用中的抗病毒效果[5],而且靛蓝和靛玉红均为脂溶性组分, 目前生产复方板蓝根颗粒的工艺以水煎煮提取或水提醇沉为多,此两种制剂工艺对脂溶性成分靛蓝和靛玉红的提取效率均不高,并且经研究[4]表明不同批次板蓝根药材中靛蓝和靛玉红的含量相差极为悬殊,靛蓝的含量范围为0.1280~4.095mu;gg-1 ,靛玉红的含量范围为0.1209~73.609mu;gg-1 ,综上所述,以靛蓝和靛玉红两种成分在制剂中的含量作为复方板蓝根颗粒的定性及定量指标是不可靠的。
同样的,有机酸类成分在复方板蓝根颗粒中的含量太低,亦不适宜将有机酸类的含量作为其质量评价指标[5]。
虽然目前对该制剂中的多糖类成分也有一定的研究,但是,目前为止,尚未从中分离出单体成分,也没有多糖组成的具体报道,因此,以多糖的含量作为评价指标还有待进一步研究。
近年来已有不少学者对复方板蓝根颗粒活性成分的含量测定进行探索研究,但均以测其中某一个或者两个成分居多,然而该制剂的临床功效是多成分综合作用的结果,单一指标成分的定性鉴别、定量分析不能切实地、全面地反映制剂的临床功用,所以进行多个指标成分的质量评价对于提高该制剂的质量标准有着很重要的现实意义。
复方板蓝根颗粒成分组成复杂多样,现代药理研究表明:板蓝根中的腺苷等核苷类成分能够干扰各类病毒合成其核酸,是该制剂抗病毒的活性成分之一,此外核苷类还具有抗炎作用, 可以用于诊断冠心病,而且具有很高的敏感性及特异性[6];制剂中的(R,S)-告依春等含硫类成分具有显著的抗流感病毒作用[6,7];制剂中所含的结合氨基酸类成分则是抑制多种病毒感染以及增殖的活性部位[8][9]。
研究不同批次板蓝根样品中这4种成分的含量,结果表明各成分的含量有着较大的差异,尤其是腺苷和(R,S)-告依春的含量差异分别高达15倍和7倍之多[10],可见建立该制剂中活性成分含量的质量评价标准的必要性及其对控制该制剂临床疗效的重要性。
高效液相色谱在成分组成复杂多样的中药制剂含量测定方面具有高柱效、高灵敏度、分离速度快、重现性好、操作简单方便等优点,随着色谱技术的提高,其在中药化学成分的分离、含量测定方面的应用也越来越广泛,所以本研究将采用高效液相色谱法,以尿苷、鸟苷、(R,S)-告依春和腺苷作为对照品(用5%甲醇制备成为具有一定浓度的对照品混合溶液),同时对不同批次复方板蓝根颗粒中的尿苷、鸟苷、(R,S)-告依春和腺苷四种活性成分进行含量测定。
在前期学者研究的基础上,结合四种活性成分基本性质[5] [7][9][15][16][17] [19][22]:以甲醇作为溶剂超声提取腺苷, 其提取效率高于乙醇作为溶剂超声提取和甲醇加热回流提取,且提取液色谱图中没有其他组分的干扰,能够得到分离度良好的腺苷峰[18];对于氨基酸类和(R,S)-告依春水溶性成分,虽然以水作为溶剂提取其含量更高,但研究表明(R,S)-告依春在水中的稳定性差,加入一定量的甲醇可增加其稳定性;为使四个目标成分均能较好的溶解的同时具有一定的稳定性,经优化比较决定以5%甲醇超声提取30min,将经过0.22mu;m微孔滤膜滤过的续滤液作为供试品溶液。
