课题背景：
海胆是生长在海洋里的一种棘皮动物，其半球形的外壳由带有棘刺的坚硬石灰质构成，外壳包裹的体腔内有五小块黄色的稠粥样物，即为海胆黄。研究表明，海胆黄能降低人体内血清胆固醇和甘油三酯，有提高机体免疫力、稳定血压和预防动脉硬化的作用，因此，具有防治心脑血管病的功能。动物实验显示，海胆黄的提取物能增强运动耐力，延长动物存活时间。我国是海胆资源比较丰富的国家，约有100多种，包括8目，27科，69属。雌海胆的生殖腺即海胆黄为名贵的海产珍品，被称为云丹，含有丰富的蛋白质、多糖、脂肪酸、维生素及各种微量元素等对人体十分有益的营养成分，因而海胆不但具有较高的食用价值，同时还有极好的药用价值，尤其对增强人体免疫力、防治心血管疾病有较好的效果。本实验室从光棘球海胆（Strongylocentrotus nudus ）的海胆黄中分离纯化得到的均一SEP多糖组分，纯度达93.6%。并报道SEP具有显著抑制小鼠肝癌H22细胞的体内生长的作用，抑瘤率高达60.1%。进一步研究发现，SEP可能通过激活脾细胞上的TLR4受体发挥其免疫调节作用。实验室前期研究中，从光棘球海胆中分离纯化得到了一种成份均一，结构新颖的海胆黄多糖（polysaccharide from the eggs of Strongylocentrotus nudus，简称SEP），分子量1950 kD左右，单糖组成为葡萄糖 ，研究发现：SEP在体内刺激淋巴细胞增殖，促进细胞因子分泌，抑制S180实体瘤、H22肝癌及小鼠Lewis 肺癌的生长，具有显著的免疫活性和抗肿瘤活性，有较广阔的应用前景。在分离纯化海胆黄多糖SEP过程中，发现海胆黄粗多糖溶液通过离子交换层析柱水洗脱后，用0-1 mol/L的NaCl溶液梯度洗脱时，收集得到一种新的多糖组分，并命名为SEP-S。本实验旨在优化该新多糖组分SEP-S的分离纯化工艺，并初步验证其体外对小鼠脾细胞及肿瘤细胞生长的影响。
实验流程：
1、海胆黄盐洗多糖的纯化
1.1 离子交换柱层析
将粗多糖配成20 mg/ml的溶液上平衡好的DE-52离子交换柱（phi; 4.5 cm30 cm），双蒸水洗脱，流速0.5 ml/min，每管10min分部收集，苯酚-硫酸法跟踪测定糖含量，绘制洗脱曲线，合并相同组分。继续用双蒸水冲洗过夜，再用1M氯化钠洗脱DE-52柱，苯酚-硫酸法测定糖含量，绘制洗脱曲线，收集相同组分，即为一种新的盐洗脱组分。
1.2 凝胶过滤柱层析
经离子交换柱处理的组分浓缩后上平衡好的Sephacryl S-400凝胶层析柱（phi; 1.6 cm 110 cm），双蒸水洗脱，流速0.2 ml/min，每管15 min分部收集，用苯酚-硫酸法测定糖含量，绘制洗脱曲线，合并相同组分。
1.3 SEP-S纯度鉴定
Waters 600高效液相色谱系统，采用Shodex sugar KS-805色谱柱，2414示差折光检测器，流动相为纯净水，样品浓度为5.0 mg/ml，进样量20 mu;l，流速1.0 ml/min，柱温30℃，记录样品色谱曲线。
