开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一拟研究或解决的问题
机体在受到外源性有毒物质和活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)干扰时,会形成一套复杂的氧化应激应答系统,当暴露于ROS时,机体自身能诱导出一系列保护性蛋白以维持组织细胞正常功能,如谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferase,GST)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(quinoneoxidoreductase,NQO1)、超氧化物歧化酶SOD等,以缓解细胞所受的损害[7,9]。这一协调反应是由这些保护性基因上游调节区的抗氧化反应元件(antioxidantresponsiveelement,ARE)来调控的[7]。而近些年的研究发现,核因子NF-E2相关因子(nuclearfactorerythroid2-realatedfactor2,Nrf2)是ARE的激活因子。迄今发现,Nrf2-ARE通路在抗肿瘤、抗应激、抗凋亡、抗炎症反应、抗动脉粥样硬化、以及调节心脑血管反应、神经保护等方面发挥着广泛的细胞保护功能[7,13]。
丹参的主要有效成分为丹参酮等脂溶性成分和丹酚酸等水溶性成分两部分,现代药理研究结果表明丹参具有有效的抗氧化、抗癌、对心血管的保护作用[1,3]。有文献报道,丹参的心血管保护作用与Nrf2-ARE通路有关,但具体机制不明[3,14,15,16]。
本课题拟应用荧光素酶报告基因的方法,建立基于Nrf2-ARE通路的药物高通量筛选模型,利用该模型从丹参提取物中筛选能激活Nrf2-ARE通路的活性成分,并对筛选出的活性成分进行生物学验证。
二采用的研究手段
丹参提取物的各馏分制备:对丹参提取物进行色谱表征,将液相分析系统与自动组分收集系统连接,收集各组分,并离心浓缩干燥,用于活性筛选。
活性组分的初步筛选:应用荧光素酶报告基因的方法,建立Nrf2-ARE通路的药物筛选模型,对以上收集到的各组分进行初步活性筛选。
活性组分的验证:丹参中初步筛选出的活性成分进行不同水平的验证,包括细胞因子、蛋白质、RNA水平,以明确筛选出的活性成分确实具有诱导产生抗氧化蛋白的作用。
三文献综述
