一、 研究背景套索肽(Lasso peptide)是一类由核糖体合成并经翻译后修饰、具有套索结构的天然肽。
特殊的拓扑结构赋予该类肽超强的耐理化及蛋白酶水解的稳定性。
1,2从发现套索肽至今,关于其生物合成途径、穿环与脱环的机理一直激发着科研人员的研究热情。
但截止目前,套索肽生物合成基因簇中相关基因产物的异源表达纯化难度却超乎了大家的预期,尤其是环化酶 C,至今未有关于该酶顺利表达和纯化的报道。
这些困难都阻碍了对套索肽生物合成过程中最关键的成环机制的深入了解及阐明。
3近年来,随着基因组测序技术的发展,大量新的套索肽生物合成基因簇被发现,通过序列分析比对选择多个不同的基因簇进行研究将能极大地提高套索肽生物合成机制被详细阐明的可能性。
4Streptomyces .nobilis ATCC19251 是实验室购买保存的一株链霉菌,通过对其进行全基因组测序,发现在链霉菌 Streptomyces .nobilis ATCC19251 基因组中含有3个套索肽生物合成基因簇。
通过对这3个套索肽基因簇进行基因序列比对以及预实验,本研究最终选择了其中1个基因簇进行了深入研究。
研究内容主要围绕以下这个方面,即将套索肽生物合成相关蛋白nobi-C在大肠杆菌中进行异源表达、纯化及体外活性验证等相关研究。
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