开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、拟研究的问题
二、安石榴皮是一味中药,具有涩肠止泻,止血,驱虫之功效。在现代药理学研究,表明安石榴苷在糖尿病、非酒精性脂肪肝等代谢性疾病中具有良好的治疗潜力,安石榴皮中多酚类物质具有抗氧化作用[1]。本课题将运用现代分析手段UPLC-LTQ-Orbitrap-MS对安石榴皮提取物进行成分的分离分析和鉴定。本研究保证了安石榴多酚提取物样品质量的可靠性与有效性,也为后期药理活性成分的筛选以及药理活性研究奠定了基础。
三、研究手段
UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术是本研究采用的核心手段。UPLC采用了新型的色谱填料及装填技术,配备了优秀的超高压液相色谱泵、自动进样器、高速检测器,并优化了系统的综合设计,使仪器分析能力大大增强。LTQ-Orbitrap-MS可以区分复杂背景中的杂质及共流出物,进行痕量分析,降低了对样品前处理的要求,适用于色谱条件优化困难的情况,即使进行多组分同时分析也不会损失灵敏度。同时Orbitrap质量分析器提供的精确分子量,有利于中药小分子的结构鉴定。
四、文献综述
安石榴皮是中药中的一味常用药,对与止血止泻有奇效,为了中药现代化的发展,中药认可度的提高,对于安石榴各种药理活性的研究也是极为重要的。目前国内外对石榴及其产品的研究主要集中在石榴汁的保健作用[2-3]、石榴提取物抑菌作用[4]、抗心血管疾病和抗癌作用[5-8],以及石榴花、石榴皮提取物抗氧化作用等方面[9-11]。石榴皮多酚中对其主要活性成分和体内外抗氧化生物活性缺乏系统研究[1]。
安石榴是一种药食同源的药用植物,在多个部位都可提取出植物中的活性成分,其中石榴皮作为传统中药,常用于治疗久泻、出血、蛔虫等症[12]。石榴汁中含有丰富的多酚成分,特别是花青素,它可以使石榴果实呈现鲜红色[13]。1992年,Emanuele Flaccomio[14]分析了鲜石榴皮的成分,石榴皮含鞣花单宁10.4%~21.3%,蜡0.8%,树脂4.5%,甘露醇1.8%,糖2.7%,树胶3,2%,没食子酸4%等。在安石榴皮众多活性成分中,其总多酚成分也常作为主要的研究对象,总多酚类成分中有四种主要的多酚类成分没食子酸(Gallic acid)、石榴皮鞣素(Punicalin)、安石榴苷(Punicalagin)、鞣花酸(Ellagic acid),可以通过RP-HPLC进行特征性成分的测定[1]。中国药典规定干燥的石榴皮中所含鞣质不得低于10.0%[15]。鞣质可作为石榴皮质量检测的主要成分,因此可以根据文献[16],采用毛细管电泳法来测定石榴皮中鞣花酸和安石榴苷的含量,用较短的分析时间来分析石榴皮中的多种鞣质成分。但是,以上方法对于安石榴成分的鉴定能力不足,导致安石榴多酚类物质组的表征研究不充分,进而限制了安石榴药材的进一步开发和利用。
笔者课题组所选用的分析方法为超高效液相与线性离子肼离子静电场轨道肼质谱仪,UPLC具有分离效率高,分析时间短等特点适合于中药石榴皮多成分的表征分析,Orbitrap-MS是一种结合了新颖结构和突破性技术的质谱仪器,由内外电极产生四倍对数的电场,通过离子的回旋振荡产生镜像电流,经微分放大后由傅立叶变换器得到各离子的振荡频率,最后计算出离子的质荷比(m/z)。这种通过频率来测量质荷比的方式,可以得到超高的分辨率以及质量精度 [17]。2005年,Makarov在orbitrap设计的的基础上,推出了一种全新结构的组合型质谱仪:线性离子肼静电场轨道肼质谱仪(LTQ-Orbitrap MS)。前端的LTQ-MS是可独立工作的低分辨质谱,后端的Orbitrap-MS是个独立的高分辨质量分析器,能够提供精确质量数,从而推断元素组成。在Orbitrap-MS进行高分辨扫描时,LTQ MS可同时进行多个数据关联的MS/MS或 的扫描,实现了高、低分辨双质谱同时分析[17]。
