Blebbistatin对氧糖剥夺诱导的BV2细胞线粒体分裂的作用研究课题性质 radic;基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究拟研究或解决的问题：本课题拟考察麦冬皂苷结合蛋白抑制剂(Blebbistatin)能否有效抑制OGD诱导BV2细胞线粒体的分裂，并初步探讨可能的作用机制，为麦冬皂苷结合蛋白抑制剂（Blebbistatin）防治中风提供一定的实验参考依据。
采用的研究手段：（1）BV2细胞复苏传代培养 将液氮中存放的BV2细胞融化，1000rpm，离心5min，将冻存管中上清液倒掉，加入培养基，轻轻吹打，再将细胞悬液转移至培养瓶中，加入充足的培养基，吹打均匀，孵箱培养。
传代时，用PBS清洗，加入消化液，显微镜下观察，发现细胞质回缩，细胞间隙变大，终止消化。
重新加入培养基，吹打均匀，吸取合适数量的细胞悬液，至新培养瓶中，再补足培养基。
（2）OGD诱导BV2细胞中线粒体分裂取BV2细胞，替换培养液，更换为DMEM 无糖培养基，在37℃培养箱孵育1h。
再将细胞置于厌氧培养箱内，通入5% CO2、10% H2 和85% N2，使箱内氧浓度＜1%。
，孵育4 h。
（3）Mito-Tracker测定线粒体分裂 将200mu;MMito-Tracker工作液用无血清培养基稀释成400nMMito-Tracker染料工作液（37℃温育），37℃下细胞染色30min，去除Mito-Tracker工作液，加入PBS清洗细胞，使用激光共聚焦显微镜拍照。
（4）Western法测定p-Drp1的表达 等量加入细胞裂解液后，提取BV2细胞的蛋白，4℃裂解20 min。
离心去上清液。
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