一、实验背景
“佐太”为藏语译音(也有音译为“佐塔 ”)。“佐 ”为炼制之意 “太”为灰或炭之意，即为煅烧成灰，也就是在金属汞中加以“八金”“八矿”等珍贵药材，经过洗、涤、煮等多道复杂炮制工艺 ,再去垢、去锈、除汞毒，然后加金属药材, 煅炭存性而成的水银灰药。佐太并不单独使用,常与诸药相配，来增强疗效，缓解毒性。它是生产“七十味珍味丸”、“二十五味松石丸”、“仁青常觉”、“坐珠达西”等名贵藏药的一味重要的金属药。这些药品大多具有安神镇静、通经活络、醒脑开窍、清热解毒、益肝利胆、健脾养胃、等功效，是治疗心脑血管疾病、肝胆疾病、脾胃疾病、各种中毒症、胶原性疾病和其它一些疑难病症的特效药品 ,对部分癌症也有较好治疗作用，藏药 “佐太”的炮制需要2个月左右，主要由水银洗毒、八金八矿煅灰和水银合炼三部分。长期以来由于佐太药用奇特,工艺复杂,传授神秘 ,导致各个地区分别拥有自己的佐太炮制工艺。由于各地的佐太样品收集十分困难 , 因此佐太炮制并没有统一的质量规范，导致各地炮制的佐太有一定的区别。
对佐太进行成分分析发现其中含三十多种元素,其中以H g、S含量最高(除C、H、O 外), 分别占总组成的42.66% 和43.30%。此外,还包括 A l、A s、A u、Ag、Zn、Cu、Si、Ca、Mg以及多种未见研究报道的元素，通过X射线衍射发现有六 方 晶 系 的HgS、立 方 晶 系 的H gS、单 质C、FeC、(S4N3)Cll、Fe3O4等晶系存在，其中硫化汞和单质硫的含量大于90%，可以认为汞在佐太中是以硫化汞的形式存在的。
佐太虽然已经被证实能明显延长小鼠惊厥潜伏期及死亡潜伏期;能明显降低因伤寒Vi多糖疫苗致热的新西兰兔体温;能显著降低二甲苯致小鼠耳肿胀程度;可明显提高小鼠廓清指数和吞噬指数。说明佐太具有良好的抗惊厥、解热、抗炎及增强免疫力的作用。但因为其中含有汞和金、银等许多有毒重金属，它们的存在对于佐太的安全性评价有较大的影响，经千百年临床应用验证和现代毒理实验证明长期使用对人体无明显的毒性作用, 对机体的一般状态、生长发育、血液指标、肝肾功能、重要脏器的组织学结构均无明显影响, 可以放心服用，同时也证明佐太的毒性极低，在临床剂量和临床服药周期内对机体的外观体征、行为活动、体重增长均无不良影响，且佐太几乎不单独用药，多和其他药物配伍成方，且在藏药方剂中, 佐太入药的方剂很多, 其所占比例各不相同，据测定:七十味珍珠丸中佐太占5.81%；仁青芒皎中为4.48%；仁青章皎中为2.28%；二十五味松石丸中为2.89%；二十五味珊瑚丸中为1.63%；大 月晶丸中为5.56%；二十五味昂日丸中为3.4%；昂日宝丸中为1.98%。除了七十味珍珠丸和大月晶丸中比例较大外 ,其余各方中较小，因此从整个方剂量来看佐太所占比例还是很小因此对整体方剂的毒副作用影响较小。
目前研究中主要问题其一在于其中汞的含量较高，而汞作为重金属则会在体内蓄积，汞蓄积一定量会造成中毒现象，有研究表明肾脏是无机汞主要蓄积的器官长期摄入会产生一些可逆性的损伤，药物对大鼠肾脏中 Kim-1、MT含量没有产生明显影响，但相应的Kim-1和MT-1 mRNA表达水平却有一定程度的升高，停药后能可逆性恢复，说明佐太中的汞于肾脏之中的蓄积可以被很好的排泄出去。这说明长期大剂量的使用该药物能引起肾脏一定程度的潜在损伤，但该损伤是可逆的，这提示我们，临床上若长期大剂量使用该药物，需对患者的肾功能进行跟踪监测 。其二在于佐太的炮制工艺复杂，且方法重多，个体差异较大，可能对用药造成影响，而且因为其炮制工艺复杂，对于佐太中起效的主要成分至今也没有定论，这也成为佐太药理毒理研究中的难点与重点。
由于佐太的各种已经经证实的药理作用都表明它的功效大多都和神经药理相关，因此大胆拟选了与神经药理关系密切调控脑内细胞凋亡的蛋白酶家族Caspase-3作为检测的指标。研究还表明Caspase-3与多种疾病的产生有关，有关细胞凋亡的失衡是肿瘤产生与并影响肿瘤的生物学行为，在胰腺癌的发生发展过程中，Survivin蛋白通过直接或间接途径抑制Caspase-3的表达而抑制肿瘤细胞凋亡，允许变异细胞异常增殖，从而促进肿瘤的发生。Caspase-3 表达增高在乳腺癌的发生、发展过程中是一个经常性的事件,证实它们之间有相关性，而对于肺癌组织进行免疫组织化实验发现Caspase-3表达率低于健康组织，证实在肺癌组织中有明显的凋亡下调的现象,Caspase-3蛋白的表达与病理类型、分化程度和淋巴结转移都相关。Caspase-3不仅在皮层和海马区神经元的凋亡过程中起效应器的作用, 而且还直接作用于老年性痴呆形成相关的蛋白质：淀粉样前体蛋白(APP)、早衰素和Tau蛋白。由此，Caspase-3在老年性痴呆症的病理过程中也起着关键的作用。
本实验拟采用Realtime-PCR法检测Caspase-3的表达量，实时逆转录聚合酶链反应(realtime - PCR)是高通量的方法选择和准确选择基因表达分析方法。鉴于增加灵敏度,重现性和大动态范围的方法,要求适当的内部控制标准化的基因变得越来越严格。实时PCR基因表达提供了同时测量在很多不同样本中多数量的基因,使检测敏锐起来,尤其是适合当只有一小部分细胞作为样品的实验。这种技术有极大的优势,同时检测的基因量和高度的自动化可能比传统量化的方法,如northern-blot分析、核糖核酸酶保护试验,或竞争性RT-PCR法更具有优势。
二、实验目的和意义
采用Realtime-PCR法检测给药佐太，beta;-HgS的小鼠大脑与小脑中Caspase-3的mRNA的表达量，以期能初步判断佐太在体内作用的途径与方式。
三、实验内容
