开题报告内容：
拟研究或解决的问题
nocU全长为1239bp，编码412个氨基酸，它位于产生菌Nocardia sp. ATCC202029内的诺卡沙星生物合成基因簇中，是其中特有的P450修饰酶。研究表明，和与其高度同源的S. actuosus ATCC25421诺西肽生物合成基因簇相比，诺卡沙星生物合成基因簇中存在三种特有的P450酶，分别为NocT，NocU和NocV。由于诺卡沙星产生菌Nocardia sp.ATCC202099存在遗传隔离，无法利用现有技术对其进行体内基因敲除，为了进一步研究NocU的功能，本课题拟通过构建NocU表达载体，实现对其在大肠杆菌中的异源表达，并通过纯化得到纯度较高的蛋白进而构建体外催化反应体系，试图确定其催化底物，并初步探究NocU在诺卡沙星生物合成过程中负责的具体修饰功能。
采用的研究手段
本实验拟采用基因工程技术，计划通过诺卡氏菌基因组提取，引物设计，PCR扩增，构建pET28a重组表达载体，构建大肠杆菌异源表达工程菌，IPTG诱导表达等方法尝试对NocU进行异源表达，然后尝试通过镍柱纯化得到纯度较高的NocU蛋白，并构建体外催化体系，通过HPLC、LC-MS/MS分析可能产物，从而初步探究其修饰功能。
文献综述
诺卡沙星生物合成基因簇中P450酶NocU的异源表达、纯化及功能初步研究
1.NocU的介绍及研究现状
诺卡沙星是从诺卡氏菌（Nocardia sp.）［1.2］或拟无枝酸菌（Amycolaptosis sp.）［3-5］体内分离得到的一类最新被发现的硫肽类抗生素，属于硫肽类抗生素家族中的e类，其生物合成通过RIPP途径。诺卡沙星对革兰氏阳性菌具有广谱抑制作用，但由于其较差的理化性质，目前没有投入人类的临床使用中［6］。但由于糖基化的抗菌诺卡沙星对于多种抗药菌的有效活性，目前已有很多研究尝试通过化学修饰，形成新的类似物，从而克服其自身的理化缺陷（如水溶性差），使其尽快投入临床使用［6］。
硫肽类抗生素主要通过抑制蛋白质的合成而达到杀菌的作用，还有研究表明，硫肽类抗生素可能具有抗肿瘤活性［7］。与大多数硫肽类抗生素相同，诺卡沙星是通过与核糖体50S大亚基中23S rRNA和L11蛋白结合，从而形成复合物，抑制L11蛋白构象的转变，进而影响蛋白质合成过程中肽链的转座，从而达到抑制蛋白合成的作用。
