开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究目的
体外构建脑血管内皮细胞-胶质细胞-神经元细胞三细胞共培养体外血脑屏障模型，这种模型具有BBB的基本结构、功能和细胞间相互作用，可用于药物筛选中药物渗透性和细胞毒性评价、紧密连接蛋白和外排转运体功能研究及3D细胞培养相对于单培养优越性研究等。本课题旨在基于脑血管内皮细胞-胶质细胞-神经元细胞三细胞共培养最经典的体外血脑屏障模型——Transwell模型构建及应用研究探索近年来兴起的能够模拟BBB中提供对正常内皮极化和紧密连接形成至关重要的血流剪切应力微环境因素的动态3D神经血管/NVU微流控芯片模型及相关应用，为BBB生理学和病理学基础研究、测试中枢作用药物候选化合物、筛选中枢副作用较小的外周系统药物及表面修饰纳米粒子靶向CNS药物递送提供有用工具。
二、研究内容
运用Transwell技术构建脑血管内皮细胞-胶质细胞-神经元细胞三细胞共培养经典的3D静态体外血脑屏障模型，采用跨内皮电阻（TEER）值测定及荧光素钠（SF）跨内皮渗透性测试等手段对模型进行评价，并进行药物渗透性（如纳米粒子）、紧密连接蛋白和外排转运体功能测定及3D培养相对于单培养优越性等方面的应用研究。在此基础上，总结前人关于近年来兴起的能够更好地模拟体内BBB结构和3D脑微环境的动态3D神经血管/NVU微流控芯片模型及在药物渗透性（纳米粒子，无公开发表数据）方面的应用研究。
三、拟研究或解决的问题
1.人永生化脑血管内皮细胞hCMEC/D3、星型胶质细胞、神经元细胞纯培养
2.脑血管内皮细胞-胶质细胞-神经元细胞三细胞共培养静态Transwell模型的构建
3.静态Transwell3D模型的表征：跨内皮电阻TEER值测定、荧光素钠SF跨内皮渗透性测定、运用罗丹明123测定P-糖蛋白的功能、运用哌唑嗪测定BCRP的功能、免疫细胞化学染色（选做）、蛋白质印迹分析（选做）等
4.静态Transwell3D模型的应用：药物渗透性测定实验等
5.新兴动态3D神经血管NVU微流控芯片模型建立及应用初探
