开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、肺炎支原体的培养方法
支原体（mycoplasma）是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。支原体培养是指将支原体接种到培养基中，并观察其生长情况，以判断有无支原体感染。
1.标本采集：对怀疑肺炎支原体感染的患者采集痰、咽拭子、鼻咽洗液和支气管分泌物。立即送检和接种。不能及时接种的标本，应放置4℃保存并于24小时内接种。
2.培养条件：支原体的营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10%～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇和酵母。支原体的最适pH 7.8～8.0之间，低于7.0则死亡。支原体的培养37℃即可，初次培养37℃，5%～10%CO2效果更好。人型，肺炎，24～48小时即可达到对数生长期。
3.培养方法：分离培养是支原体实验室诊断的惟一方法。大多数支原体兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落（圆形，直径10～16mu;m），核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。此外，支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。
二、PMBC及其分离方法
1.PBMC（Peripheral Blood Mononuclear Cell）：外周血单个核细胞，是指外周血中具有单个核的细胞，包含淋巴细胞、单核细胞、树突状细胞和其它少量细胞等。提取外周血单个核细胞（PBMC）的方法主要有：Ficoll密度梯度离心法，Percoll分层液法。
2.Ficoll密度梯度离心法
2.1原理：常用来分离外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是 1.077plusmn;0.001的聚蔗糖（Ficoll）-泛影葡胺（Urografin）（F/H）分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400000，当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周皿中分离到单个核细胞。
