开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
1.研究意义
1型糖尿病（IDDM）是一种慢性自身免疫性疾病，是免疫系统破坏胰岛beta;细胞，使胰岛素分泌减少，导致体内的糖代谢紊乱。IDDM可以通过皮下注射或者鼻粘膜免疫与IDDM相关的自身抗原，使机体产生免疫耐受的方式进行治疗。P277是人热休克蛋白60（HSP65）上的一段特异性多肽，HSP60是一种与IDDM相关的自身抗原，皮下注射P277能够阻止自身反应性T细胞破坏胰岛beta;细胞，从而对IDDM进行免疫治疗。将P277分为P1和P2两个片段，经试验验证P2是对IDDM起主要治疗作用的片段，而P1能导致动脉粥样硬化，用胰岛素瘤抗原（IA2）替换P277中的P1，新的多肽IA2-P2同样能够对IDDM起到一定的治疗作用。
IA2-P2是用胰岛素瘤相关蛋白-2（IA-2）的部分表位替换P277中的P1表位组合成的新的疫苗肽。此疫苗可以降低P277肽本身会诱发的动脉粥样硬化发生的风险，并能辅助该疫苗抗糖尿病的作用。
为了研究IA2-P2在糖尿病预防及治疗以及抗动脉粥样硬化方面的作用，使用本实验室构建的pET28a-AnsB-TTP-CETPC-6IA2P2-His重组质粒来提取蛋白，通过小鼠给药的方式来验证IA2P2疫苗的药效。
2.文献综述
门冬酰胺酶的抗癌作用早在1953年就被科学家发现，经过比较自然界中不同微生物产生的门冬酰胺酶之后，人们发现，由大肠杆菌（Escherichia coli）和菊欧文氏菌（Erwinia chrysanthemi）产生的酶具有最好的抗癌能力，除此之外，大肠杆菌产生的酶不仅效果好而且还容易做到大量生产，所以成为了目前门冬酰胺酶的主要来源。大肠杆菌内有两种L-门冬酰胺酶，一种是位于细胞质中的低亲和性L-门冬酰胺酶Ⅰ（AnsA），另一种是具有高亲和性的分泌表达的L-门冬酰胺酶Ⅱ（AnsB），Michael等通过寡聚核苷酸引物从大肠杆菌野生菌株中克隆得到AnsB[1]。AnsB单体没有催化天冬酰胺水解生成天冬氨酸和氨的活性，当单体聚合成四聚体、八聚体或者十二聚体形式时，才具有酶活性[2]。
经过试验验证，在L-门冬酰胺酶Ⅱ的C端融合线性多肽表位时，AnsB能作为一种表面呈现载体在酶分子的表面呈现融合在C端的线性外源多肽，单体发生聚合后最终在嵌合酶的每个亚基表面都呈现出一个多肽，同时AnsB还保留有较高的催化活力。AnsB除了可以呈现抗原表位，还能作为辅助性T细胞表位，加强呈现在酶分子表面的多肽表位的免疫原性，从而诱导机体产生针对多肽B细胞表位的免疫反应。
利用AnsB的抗原呈递作用[3]，在其C端融合表达外源的线性表位，本实验室祁高富博士已经成功构建了pET-28a-AnsB-TTP-CETPC载体。TTP是破伤风毒素中的一段序列，由15个氨基酸构成，序列为：QYIKANSKFIGITEL，破伤风毒素全长由1310个氨基酸构成，对人体有很强的的毒性，因此选择这个15肽作为T细胞表位，诱发机体较强的免疫应答[4]，产生抗CETP抗体。人胆固醇转移蛋白（CETP）能介导人体血浆中低密度脂蛋白（LDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白（HDL）中的胆固醇脂（CE）之间的交换[5-6]，最终导致LDL及LDL-CE的浓度提高，血浆中高浓度的LDL及LDL-CE容易诱发动脉内膜上粥样硬化斑块的形成[7-9]。因此可以通过抑制CETP的活性[10,11]来阻止LDL和HDL之间胆固醇脂的交换，从而达到抗动脉粥样硬化的效果。CETPC是人胆固醇脂转移蛋白羧基端的16个氨基酸，序列为FGFPEHLLVDFLQSLS，借助于TTP强烈的T细胞表位作用，能诱导机体产生抗CETP抗体[12]。试验验证将这两个表位融合表达，一方面可以增强机体对CETPC的免疫应答，另一方面也能使融合蛋白以可溶性的形式表达，同时对小鼠和新西兰大白兔的动脉粥样硬化有一定的疗效。
1型糖尿病（IDDM）又称为胰岛素依赖型糖尿病，是一种复杂的慢性自身免疫性疾病，它是由于胰岛beta;细胞破坏或功能缺失，导致胰岛素绝对缺乏的血糖血脂紊乱性疾病[13]，主要症状有高血糖、高血压、血脂紊乱、血管内皮功能失调、低度系统炎症等。也有研究指出I型糖尿病的发病率与HLA等位基因[14]和环境因素[15-16]有关。IDDM还能诱发动脉粥样硬化等并发症，其原理主要是在1型糖尿病患者体内有HSP65抗体，而HSP65又是血管内皮细胞表面的自身抗原，免疫系统错误识别自身抗原，发生过度免疫，自身反应性T细胞攻击自身抗原，从而损坏血管内皮细胞，发生慢性炎症反应，进而血小板聚集，血浆脂蛋白沉积，最终形成动脉粥样斑块。目前防治1型糖尿病的疫苗主要是通过建立免疫耐受[17]。
