开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
【摘要】目的研究二甲双胍对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响，并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度的二甲双胍处理人结肠癌HCT116细胞48h后，采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)实验检测其对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测其对细胞凋亡及周期的影响;Westernblotting法检测二甲双胍对HCT116细胞中bcl-2、Casepase-3及p53蛋白的影响。结果分别采用2．5、5、10、20和40mmol/L二甲双胍处理HCT116细胞48h后，CCK-8实验表明，各浓度组均可引起结肠癌细胞的增殖抑制作用，呈浓度依赖性;流式细胞仪术结果显示，经药物处理后，与对照组相比，细胞凋亡细胞比例逐渐增加。另外，肿瘤细胞G0/G1期细胞比例无明显改变，S期细胞的比例减少，但G2/M期细胞的比例逐渐升高;Westernblotting检测显示，二甲双胍可抑制抗凋亡蛋白bcl-2的表达，激活Casepase-3、p53蛋白表达。结论二甲双胍可抑制结肠癌细胞增殖，G2/M期细胞周期阻滞，促进细胞凋亡，其作用机制可能与抑制bcl-2的表达，活化Casepase-3、p53蛋白表达有关。
【关键词】二甲双胍;HCCT116;增殖;凋亡;周期
二甲双胍是一种口服双胍类降糖药物，是治疗2型糖尿病一线用药，尤其适用于超重和肥胖的患者，临床使用已证明了该药的临床安全性。近年来，流行病学研究和病例对照研究证实2型糖尿病是肿瘤的危险致病因素之一。自Evans等首次发现二甲双胍可以低2型糖尿病患者的多种肿瘤的发病率，随着肿瘤治疗研究的不断深入，二甲双胍作为一种常用的降糖药，其抗肿瘤作用越来越受到关注。目前有研究表明，二甲双胍可降低乳腺癌、肝癌、皮肤癌、子宫内膜癌等多种肿瘤的发病率及死亡率，但具体产生这一影响的机制尚不明确。本研究以人结肠癌细胞株HCT116为模型，采用不同剂量的二甲双胍处理细胞，检测其对细胞增殖能力、凋亡及细胞周期的影响，并初步探索其可能的机制。
1材料与方法
1．1细胞与试剂结肠癌HCT116细胞购自中国科学院细胞库，ＲPMI1640培养基、胎牛血清、胰酶均购自HyClone公司，二甲双胍购自Smiga公司，CCK8、细胞周期及凋亡试剂盒购自南京凯基公司，bcl-2、Casepase-3及p53购自Abcam公司。
1．2细胞培养HCT116细胞用含100g/L胎牛血清的ＲPMI1640培养基培养，将细胞置于37℃、体积分数为5%的CO2的培养箱中，隔天传代换液，当细胞融合至80%时用2．5g/L胰酶消化传代培养至对数生长期。
1．3CCK-8检测细胞增殖将处于对数生长期的结肠癌HCT116细胞用胰酶消化后，以5times;103个/孔细胞接种于96孔培养板中，待细胞融合至70%后分别加入二甲基亚砜(DMSO)和不同浓度的二甲双胍(终浓度分别为2．5、5、10、20、40mmol/L)，37℃、体积分别为5%的CO2培养箱内培养24h后，每孔加入100mu;l培养基及10mu;lCCK-8检测试剂，继续孵育2h后，用酶标仪测定450nm处OD值。设3个复孔。
1．4AnnexinV-Fitc/PI双染检测细胞凋亡收集处于对数生长期的不同处理组细胞，将细胞调整至5times;105ml-1并加入结合缓冲液Bingbuffer500mu;l，先加入5mu;lAnnexinV-Fitc，再加入5mu;l碘化丙啶(PI)，室温避光孵育20min，上流式细胞仪检测细胞凋亡率。
1．5细胞周期二甲双胍处理48h后，各组细胞胰酶常规消化，PBS洗涤2次，然后加入1ml750g/L的冰乙醇，4℃固定过夜，PBS洗涤3次，弃去上清，加入ＲNA酶及PI调整终浓度为50mu;g/ml，4℃避光染色30min，流式细胞仪检测细胞周期，比较各期细胞比例。
