前胡悬浮体系的建立及其对不同刺激的响应文献综述

 2023-01-05 07:01

综述:

前胡(Peucedanum praeruptorum Dunn)又名:姨妈菜、罗鬼菜(李宗防《黔志》),水前胡(《植物名实图考》),野芹菜、岩风、南石防风,坡地石防风、鸡脚前胡、岩川芎,分为白花前胡和紫花前胡,是伞形科芹亚科前胡属多年生草本植物,根颈粗壮,茎上部叶无柄,花瓣卵形,棕色,复伞形花序多数,顶生或侧生。花期8-9月,果期10-11月。生长于海拔250-2000米的山坡林缘,路旁或半阴性的山坡草丛中。主产于安徽、浙江、湖南、四川等地,安徽省宁国市前胡产量居全国之最。有较高的药用价值,钙拮抗剂作用,对血小板凝集的作用,祛痰作用,扩张冠脉作用等疗效。

悬浮培养是指细胞悬浮于培养基中生长或维持。利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点,比如在培养过程中,植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布,而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物产生影响,从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变而利用液体培养基则可以克服这一缺点,当植物的组织在液体培养基中生长时,我们可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡,一般可用100~120 r/min 的速度进行。由于液体培养基的旋转和震荡,使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。在液体培养基中的培养物是混杂的,既有游离的单个细胞,也有较大的细胞团块,还有接种物的死细胞残渣。在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养,因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说,细胞在培养到第18~25d 时达到最大的密度,此时应进行第一次继代培养。在继代培养时,应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系,就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作,特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株,即可获得携带有目标基因的个体。

研究手段:

首先建立愈伤组织培养体系。其过程为准备——灭菌——外植体表面消毒——接种——培养——观察——转接

在实验过程中不断摸索实验条件,首先进行单因素实验,在进行正交试验,然后研究各因素对其影响,以得到最佳的愈伤组织体系。得到愈伤组织后就开始进行建立悬浮体系。

1.培养:

在此试验中,将养好的前胡愈伤组织进行悬浮培养,建立悬浮体系。再次过程中不断摸索悬浮培养条件。挑选松散长势较好的愈伤组织并转入含有1mg/L 2,4-D 20mg/L水解干酪素的MS液体培养基中,在100rpm的摇瓶机中振荡,进行悬浮培养,第5-7天培养物用100目不锈钢丝网过滤,去掉网上的愈伤组织残留小块,收集滤液中的培养物(含细胞团和单细胞)继续培养,每周继代一次,40天后,培养物中含有大量生长快速、具有胚性的细胞团。

2.条件优化及其摸索

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