课题依据:
近年来,4-喹诺酮类成为抗肿瘤药物设计的新方向,已经报道了很多具有抗肿瘤活性的新型4-喹诺酮化合物,这些新型4-喹诺酮类化合物对肿瘤细胞的作用靶点新颖多样,主要包括DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、DNA拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)、G-四链体、微管蛋白、CK2蛋白激酶受体以及JAK-STAT3信号转导通路等。
DNA TopoⅡ是细胞内必需的一种酶,它能催化DNA双链断裂,让双链DNA从切口处穿过,再把断裂的末端连接起来,从而控制DNA的拓扑学结构和构象。由于肿瘤细胞具有快速增殖的特性,其TopoⅡ的含量及活性远远高于正常体细胞,因此抑制TopoⅡ活性能起到阻止肿瘤细胞快速生长增殖,进而杀死肿瘤细胞的作用。TopoⅡ已成为抗癌药物的重要作用靶点。
LZ-106,是喹诺酮的一个衍生物。喹诺酮类抗菌药对革兰阴性菌的主要作用靶点为DNA TopoⅡ。通过对细菌和哺乳动物TopoⅡ进行序列比较,发现两者的TopoⅡ在活性部位酪氨酸周围的序列具有同源性。研究表明,抗肿瘤药物杀死癌细胞的机制与喹诺酮类杀死细菌的机制相似,即都能捕获(或抑制)TopoⅡ和DNA,形成可裂解复合物,干扰DNA的复制,从而造成DNA损伤。
主要解决的问题:
本课题拟通过四氮唑比色实验(MTT法)、Annexin V/PI染色和Western Blot等实验方法来研究LZ-106对非小细胞肺癌的凋亡诱导作用及机制。
- 四氮唑比色实验(MTT法)
1)将实验所需处于对数生长期是的细胞按一定的浓度接种于96孔酶标板内。
2)细胞接种浓度一般在0.5~2times;104个/孔,每孔内体积为100mu;L 。
3)至于孵箱内培养24h后,加入不同终浓度的药物(每孔体积为100mu;L)作用。
4)继续置于孵箱内培养一段时间(24~72h)后,每孔加入20mu;L MTT溶液。
