开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
研究背景和立题依据
近年来，关于真核生物的mRNA3UTR(UntranslatedRegions)在肿瘤的发生发展中作用的研究取得了非常令人鼓舞的进展。目前已有研究发现，3UTR参与了一些已知的致癌基因和抑癌基因的功能调控[1]；一些抑癌基因的失活也来源于其3UTR的结构变化[2]；同时也有研究发现一些基因的3UTR在转染进入肿瘤细胞后表现出抗癌基因的活性[3]；最近又有研究发现一些基因的3UTR可以通过与其他基因竞争microRNA反应原件（MRE）来调节其他基因的表达[4]。但是关于3UTR在肿瘤血管生成中的研究尚未有报道。
细胞色素P450(CytochromeP450，CYP)4Z1是一种新鉴定的CYP4家族成员，它在乳腺癌组织中过表达，并与临床病理分级和不良预后高度相关【5】。研究发现，CYP4Z1的CDS区的重组质粒能促进乳腺癌的肿瘤血管生成【6】。然而，关于CYP4Z1的3UTR在肿瘤发生发展中的确切作用尚未明确。本课题主要研究基因CYP4Z1mRNA的3UTR与乳腺癌血管生成的关系。肿瘤的生长、发展与转移需要血管生成,微血管的生成与肿瘤的生物学行为密不可分,抑制血管生成已成为近年来抗肿瘤研究的重要课题和热点问题。目前发现与肿瘤微血管生成有关的因子有20多种。其中血管内皮生长因子(VEGF)是作用最强、特异性最高的一种血管形成因子,它可高效特异性地作用于血管内皮细胞中的受体VEGFR2（血管内皮生长因子受体2）,为内皮细胞的迁移及肿瘤细胞的转移提供基础,与肿瘤的发生发展关系密切【7】。本课题主要研究假基因CYP4Z1mRNA的3UTR对于血管内皮生长因子（VEGF）及其受体VEGFR2表达的影响。
乳腺癌是临床常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类健康,探索乳腺癌治疗新技术、新方法具有重要临床意义。本课题通过构建CYP4Z1mRNA3UTR表达载体，以人类乳腺癌细胞株MCF-7为目标进行体外培养实验，收集条件培养基及将转染的MCF-7与HUVEC共培养，通过实时荧光定量PCR以及westernblot等方法研究其对VEGFmRNA水平以及蛋白水平表达的影响，以及条件培养对HUVEC中VEGFR2的影响；同时观察条件培养基对HUVEC的增殖、迁移及其小管形成的影响，从而初步探索CYP4Z13UTR对乳腺癌血管生成的影响，让人们能更加深入的了解真核生物基因的非编区的功能，为肿瘤的研究提供一种新的思路与方法。
具体实验内容：
1、构建表达质粒Z1U
针对CYP4Z1mRNA3UTR设计适宜的引物，选取合适的PCR条件，进行扩增，获取假基因CYP4Z1mRNA的3UTR基因序列，并将其插入PEGFP-C3载体然后转化入大肠杆菌DH5alpha;感受态细胞中进行扩增，挑取单克隆，通过测序确认质粒Z1U构建成功。
2、脂质体转染
