论文题目：研究红景天苷对人脐静脉内皮细胞eNOS mRNA表达的影响
关键词：红景天苷，内皮细胞一氧化氮合酶
课题意义：在我国的要用发面，红景天苷已有几千年的历史。目前红景天苷记录在文献上公认的药理作用有抗疲劳，抗缺氧，提高血红蛋白携氧能力，抗肿瘤与抗病毒以及对心血管系统的影响等。而红景天苷与内皮细胞凋亡，尤其是对同型半胱氨酸引起的内皮细胞功能紊乱有一定疗效这一功效尚未被充分开发出来。此课题研究红景天苷对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶mRNA的影响，从生物分子学水平研究红景天苷对内皮细胞的作用。
方法：培养人脐静脉内皮细胞，在无菌条件下取新生儿脐带，预处理后培养其2到3代细胞用于实验。实验分组，分别为正常对照组，即正常培养的人脐静脉内皮细胞未经任何处理；红景天苷低剂量组，即用低剂量红景天苷处理人脐静脉内皮细胞；红景天苷中剂量组，即用中剂量处理人脐静脉内皮细胞；红景天苷高剂量组，即用高剂量红景天苷处理人脐静脉内皮细胞。在相同条件下进行实验，恒温下进行。通过倒置显微镜观察各组人脐静脉内皮细胞形态学变化，可采用逆转录聚合酶链式反应检测各组细胞内eNOS mRNA 的表达，用免疫组织化学方法检测eNOS蛋白表达，NO的水平则可以用硝酸还原酶法测定。比较四组实验数据，分析结果。
综述：动脉粥样硬化是当今社会发病率最高、危害最大的疾病之一，它是多种心脑血管事件的病理基础，可诱发多种中老年常见病。动脉粥样硬化的病理机制十分复杂，其中血管内皮细胞功能受损是动脉粥样硬化发展的始动因素之一。而一氧化氮是检测血管内皮功能的重要血清指标之一。当内源性一氧化氮介导的血管内皮舒张受损时，血管内皮功能受损。NO是由L-精氨酸和氧气在一氧化氮合成酶作用下合成的无色无味气体，在体内其半衰期只有3-5秒，经过细胞间自由弥散。在脉管系统里NO增加神经递质的释放使平滑肌松弛，血管舒张。内皮细胞产生NO可以抗血小板粘附和肌肉收缩。NO的性质决定了它很可能是内源性的抗动脉硬化分子。内皮不仅是血管与管腔之间的屏障，也是代谢活动器官，有自分泌及旁分泌等功能。内皮血管细胞在调节血管紧张度、局部相对稳态、血管床增值等方面起着重要作用。内皮对于生理性刺激后释放出一氧化氮。一氧化氮调节着血管舒张与抑制血小板聚集，促进单核细胞、中性粒细胞分子黏附，平滑肌增长。高血脂症、高血压、吸烟及氧化应激等动脉粥样硬化的危险因素抑制NO的产生，导致内皮损伤，局部缺血。
在人体内一氧化氮合酶催化L-精氨酸的胍基氮氧化生成一氧化氮。在血管功能调解中起决定性作用的是内皮型NOS（eNOS），它是NOS的一种亚型。人的eNOS基因位于7号染色体，共21kb，包含26个外显子和25个内含子。eNOS的表达水平是NO生成的决定因素，eNOS的功能降低或合成减少，不能维持正常内皮细胞功能，从而诱发动脉粥样硬化。红景天苷是药用植物红景天的根部活性成分。红景天可用于治疗哮喘，慢性阻塞性肺气肿，流行性感冒等。随着中药研究的重新新起，开始发现它的更多的潜在药用价值，近期发现它的根部活性成分即红景天苷可以抗氧化，降血糖及加速诱导氮氧化合物合酶基因的表达。红景天苷的抗疲劳，抗缺氧，提高血红蛋白的携氧能力抗肿瘤及抗病毒在特定条件下都用实验进行了证实。并且根据药理学研究和临床疗效可以得出红景天苷对心血管疾病也有显著疗效。在体外实验中，红景天苷还显示出了可以保护由于缺氧和氧化造成的心肌损伤，由此还可以证明红景天苷具有抗缺血再灌注的能力。经试验证实，红景天苷可以对抗同型半胱氨酸引起的内皮细胞功能紊乱，同型半胱氨酸联合应用红景天苷对人脐静脉内皮细胞的抑制率显著低于单独应用同型半胱氨酸。研究发现，同型半胱氨酸损害内皮性一氧化碳介导的血管内皮舒张，导致内皮功能障碍。红景天苷则可通过减少氧化应激抑制同型半胱氨酸对内皮细胞的损害。通过查阅文献，推测红景天苷对内皮细胞一氧化氮合酶mRNA有一定作用，可促进内皮细胞一氧化氮合酶mRNA表达使内皮细胞释放一氧化氮而使其舒张，对内皮细胞有一定的保护作用。红景天苷很有可能通过此种途径来缓解同型半胱氨酸对内皮细胞的功能损害。此课题即讨论红景天苷对人脐静脉内皮细胞eNOS mRNA的影响。实验研究选取人脐静脉内皮细胞作为培养细胞进行实验，脐静脉内皮细胞不同于静脉血管内皮细胞和动脉内皮细胞，是一种干细胞，能无限次传代（理论上），易于实验操作。
实验结果预测：与对照组相比，低剂量，中剂量，高剂量红景天苷实验组一氧化氮mRNA表达依次增加，经红景天苷处理过的脐静脉内皮细胞形态与对照组有所区别，且经红景天苷处理过的人脐静脉内皮细胞中NO含量高于对照组，eNOS的活性也高于对照组。
参考文献：
(1)靳荣光，王秋娟，颜天华，王彦，曹永兵.红景天苷和高糖诱导损伤的内皮细胞保护作用研究；中药药理与临床 2012；28（5）：:41-44
(2)张敬各，张瑞明，李著华.同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响；(3)四川生理科杂志2006；28（4）：151-154
