CCR5突变型人胚胎肾细胞的分离与鉴定文献综述

 2023-02-12 08:02

获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),俗称艾滋病,是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)引起的一种危害性极大的传染病。

自1981年首次在美国报道以来,感染人数逐年上升,给人类健康带来了极大威胁。

C-C趋化因子受体5(CCR5)是HIV-1侵入CD4 细胞的重要趋化因子和受体。

CCR5△32缺失是一种DNA水平上的突变,使CCR5功能蛋白不能正常表达,故发生此种突变的细胞对HIV-1感染有抵抗力。

因此,研究CCR5野生型及CCR5△32突变型细胞对艾滋病的治疗和预防具有积极意义。

主要解决的问题:人胚胎肾细胞HEK293系列是常用的表达外源基因的细胞株,尤其适用于病毒的侵染实验,其中,有报道称HEK293A和HEK293T细胞可能为CCR5△32突变的杂合子。

为了考察HEK293A和HEK293T细胞CCR5基因的分型,并分析其中CCR5△32突变杂合是否对HEK293A细胞被病毒侵染能力有影响,本研究将从HEK293A和HEK293T细胞株中分离出单克隆细胞,通过基因分型检测,筛选出CCR5野生型纯合子及CCR5△32突变型杂合子,并对二者的病毒转染能力进行考察。

研究手段:1.单克隆细胞的分离与培养通过单克隆细胞的分离与培养,可以获得从单个细胞分裂而形成的细胞群,从而便于下一步经基因分型检测筛选出CCR5野生型纯合子及CCR5△32突变型杂合子。

实验方法:(1)培养HEK293A同源细胞至半汇合状态,更换一次培养液,再培养24 h,吸出所有培养液,以3000r/min离心,滤器过滤。

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