简介：目前糖尿病的治疗方法主要包括药物治疗、胰岛素注射和胰岛移植（Islet transplantation）。
随着免疫抑制剂的改进和细胞移植技术的不断成熟，胰岛移植已成为治愈1型和部分2型糖尿病的首选方法，然而胰岛供体短缺制约了这一技术的临床应用[1]。
胰腺祖细胞（Pancreatic Progenitor Cells, PPCs）是存在于胰腺组织中的具有自我更新和多分化潜能的成体干细胞。
体外分离、克隆PPCs，并将其诱导分化为胰岛素分泌细胞，可作为糖尿病细胞替代治疗的种子细胞，进而解决胰岛供体短缺的问题，然而祖细胞在体外增值能力有限，且容易进行非特异性分化，因此如何实现胰腺祖细胞在维持干性的条件下大量增值，是目前急需解决的可行性问题。
microRNAs（miRNAs）是一类长约22 nt的非编码小RNA，能在转录后水平通过与靶基因互补配对将其降解或抑制翻译，调控细胞增殖、分化、分泌和凋亡等，在动物发育、生理机能调控和疾病发生等过程中起作用[2-3]。
Mugdha V. Joglekar[4-5]等人研究发现miR-15a, miR-15b, miR-16 and miR-195促进胰腺的发育和再生, Fu X[6]等人研究发现miR26a参与调控PPC的发育，Bai C[7]等人研究发现miR21促进PPC分化为胰岛素分泌细胞，以上研究暗示miRNA参与了PPC的增值与分化，Jan-Wilhelm Kornfeld [8]，Chigusa Higuchi[9]等人发现过表达miRNA-802引起2型糖尿病的发生，说明miRNA-802影响胰腺的发育。
课题组通过高通量测序分析PPC及胰腺组织，发现miRNA-802在PPC中低表达，说明高水平miRNA-802抑制PPC细胞增值；targetscan，BiBiserve软件预测分析表明miRNA-802与HNF1B（Hepatocyte Nuclear factor 1 homeobox B, HNF1b）存在靶向性，研究发现HNF1b是维持祖细胞干性的主要转录因子，在体外有效维持PPC细胞干性。
本研究拟通过双荧光素酶报告法、Real-Time PCR， Western blot等实验方法，确证miRNA-802/HNF1b存在靶向性，为实现PPC在体外高效扩增、开发信号转导相关药物提供科学依据。
2基本研究方法2.1Bibiserve/HNF1b靶基因预测http://bibiserv.techfak.unibielefeld.de/rnahybrid?id=rnahybrid_view_submission）计算靶基因自由能（1）在ncbi中查找基因的核算序列，选择鼠源序列，删除CDS序列（2）miRBase（http://www.mirbase.org/）查找mRNA序列（3）将靶基因序列及mRNA序列复制到Bibiserve，使用软件预测HNF1b的自由能。
2.2HNF1b靶基因构建（1）在targescan中查找HNF1B的序列，选取与miRNA-802的同源序列，构建长度为59 bp的野生型片段（Wild-Type,WT），将与miRNA-802同源性的碱基按照UC，A G的碱基互补配对原则获得突变型序列(Mutation-Type，MU)。
