开题报告课题名称：流感病毒的分离和鉴定指导老师：雍玮实习单位：南京市疾病预防与检测中心微生物检验科本课题的主要内容是针对南京市目前流行的流感病毒进行分离和鉴定。
南京市疾病预防与控制中心微生物检验科病毒组承担了南京市流感监测及多种病毒常规和急性检测的工作和任务，已经建立了从细胞培养、病毒分离、血清学检测、到核酸检测、荧光定量PCR、RT-PCR、基于全基因组测序的分子遗传变异跟踪技术，形成了完整的流感病毒检测体系。
本课题拟通过对南京市目前流行的流感病毒进行分离，掌握无菌操作、细胞培养和病毒分离和鉴定的基本操作，实现对流感病毒的监测和疫情预报。
计划及安排：根据指导老师的安排，实习总体分为三个阶段：第一阶段的主要任务是1查阅病毒检测相关的文献，2其次是跟随指导老师的工作研究，认识病毒分离的全部流程3学习掌握无菌操作和细胞培养，因为这整个工作的基础，属于基础技能，必须扎实掌握。
第二阶段主要任务是运用第一阶段学习到的基础技能进行病毒的鉴定和分离操作，病毒的分离主要有两种方法，第一种是MDCK细胞分离法（包括红细胞凝集实验），第二种是鸡胚培养分离法，重点掌握第一种方法。
因为这一阶段内容较多，操作难度及要求较大，所以所需时间较长。
第三阶段的主要内容学会了解使用荧光RTPCR对病毒核算进行快速鉴定以及学会分析RT-PCR图谱，第二个任务是完成毕业设计的终稿。
正文流感病毒的分离培养和鉴定方法病毒的分离培养 流感病毒的分离培养主要采用MDCK细胞和鸡胚培养方法分离病毒，具体技术如下：1 MDCK细胞分离病毒方法1.1 MDCK细胞培养技术生物安全级别和生物安全规定1.1.1细胞培养的所需材料a）生长成片的MDCK细胞；b）无菌的T-25细胞培养瓶；c）D-MEN培养液；d）青霉素（1000U/mL）、链霉素（10000ug/mL），分装后保存于-20℃；e)HEPES缓冲液，1mol/L母液；f）胎牛血清；g）EDTA-胰酶（0.05％胰酶；0.53mmol/L EDTA），分装后保存于-20℃；h）牛血清白蛋白组分V，7.5％溶液；i）1mL、10mL无菌移液管；j）70％-75％的乙醇。
要求：经常检查试剂的使用有效期。
