课题名称 GRS对OGD/R诱导小鼠脑微血管内皮细胞屏障破坏的保护作用课题性质 radic;基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究拟研究的问题：生脉散，亦称生脉饮，是由人参、麦冬和五味子三味药组成的著名的传统中药方剂，具有益气生津、敛阴止汗之功效。
课题组前期大量研究，在该古方治疗心脑血管疾病的基础上，经正交实验均匀设计、定量药理学反复筛选优化出由3个有效成分（人参皂苷 Rb1、鲁斯可皂苷元、五味子醇甲）组成的活性成分群GRS（Rb1:Rus:SA=6：0.75：6）。
并证明GRS可从降低氧化损伤、抑制炎症反应和钙超载等多途径改善心肌缺血损伤。
然而，其是否对缺血性脑中风有保护作用及其机制，并未被报道。
本课题拟从细胞水平考察GRS对OGD/R诱导小鼠微血管内皮细胞屏障破坏的保护作用，并初步探讨可能的作用机制，为研发临床用于脑缺血性疾病的中药新药提供一定参考依据。
采用的研究手段：（一）MTT检测GRS对OGD/R模型下bEnd.3细胞活力的影响bEnd.3细胞在培养皿中生长至融合状态，采用胰蛋白酶溶液消化，并反复吹打至细胞悬液，以含10 % FBS的DMEM培养基稀释成5105 个/mL，每孔100 mu;L接种于96孔培养板中，在37C，5% CO2条件下培养24 h，成融合状态，于实验前换无血清培养基同步化培养1 h。
实验设定为空白对照组、OGD6h/R18h模型组，给药组（浓度为10mu;g/ml），每组六个复孔，作用24 h后MTT法检测药物对正常bEnd.3细胞毒作用。
MTT法测定细胞活力：各组细胞弃去培养基，PBS洗两次，每组加入0.5 mg/mL MTT，37C，5% CO2条件下孵育3 h，除去MTT工作液，每孔加入150 mu;L DMSO溶解结晶，振摇10 min，测定每孔的OD值(测定波长570 nm，参比波长650 nm)。
（二）GRS对OGD/R诱导小鼠脑微血内皮细胞通透性的影响该体外细胞单层模型由上、下室两部分构成，Transwell小室位于上室，下室是24孔细胞培养板。
HUVEC以1105接种transwell上室，上室、下室各加0.5ml和1.5ml含血清培养液，置于培养箱中常规培养48小时，48小时后检测TER直至TER稳定不变。
