氯化铵甘草口服溶液等三种常见医院自制制剂的微生物检查方法验证
药品的安全性是药品在临床应用的重要前提及必要保证，也是优先于药品有效性、经济性的重要因素。避免受到微生物污染的制剂作用于人体，从而危害患者生命安全的事件出现，是每个药学工作者神圣的责任。【1】据报道，2006年的欣弗注射液事件就是【2】由于上海华源股份有限公司安徽华源生物药业有限公司生产的欣弗注射液未按照批准的工艺参数灭菌，私自降低灭菌温度、缩短灭菌时间、增加灭菌柜装载量，最终影响了灭菌效果而导致的。经中国药品生物制品检定所对相关样品进行检验，结果表明无菌检查和热原检查不符合规定。【3】2008年的刺五加注射液事件也是由于黑龙江省完达山制药厂生产的刺五加注射液被雨水浸泡，使药品受到细菌污染，厂家却未予以重视，仅更换标签继续使用而导致的。2016年的山东毒疫苗事件也是这样。这一系列的惨痛教训提醒我们：对药品进行微生物检测是保证患者用药安全不可避免的重要环节。
医院自制制剂【4】是医院及相关单位根据医疗需要而自行配置的药品，主要特点是剂型多，产量少，储藏有效期短。这些按质量标准和有关要求配置的自制制剂不仅可以为医院减少开支，增加效益及收益，更重要的是能弥补医药市场的不足，方便临床用药。作为一类特殊并需要特别关注的药品，医院自制制剂不可避免的要进行微生物检查，但由于历史的原因，多数医院自制制剂的微生物控制标准要低于同期的药典标准。【5】本课题研究的是三种医院自制制剂：第一种为氯化铵甘草口服溶液【6】，主要用于上呼吸道感染、支气管炎和感冒时所产生的咳嗽，咳痰不爽、干咳及痰不易咳出者。第二种为复方薄荷脑滴鼻液【7】，是用于治疗干燥性和萎缩性鼻炎的一种滴鼻剂。第三种为硼酸醇滴耳液【8】，具有抑菌、消毒、防腐的作用，主要用于慢性中耳炎患者。这三种自制制剂在质量控制方面与现行的药典存在着较大的差异，存在脱节现象，但这三种医院自制制剂临床疗效确切，使用安全，用量较大，是医院中所不可或缺的。所以，按照新版药典要求做好这三种常用的自制制剂的微生物控制，对于保障临床用药安全具有重要的意义。
中国药典1995年版二部中就存在微生物限度检查法，但是直到中国药典2005年版才逐渐重视药品的微生物检查。【9】中国药典2005年版中主要介绍了细菌及控制菌的培养温度分别为30-35℃和35-37℃，检验量、供试液的制备、菌液的制备、细菌/霉菌及酵母菌计数、以及微生物限度标准这些内容，【10】而中国药典2010年版则在2005年版的基础上增加了控制菌检查用培养基、控制菌检查等内容，具体有增加适用性检查，包括促生长能力，抑制能力及指示能力的检查，增加了白色念珠菌检查法。【11】最新的中国药典2015年版则要求更加严格，仅菌类就要测大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉等。且给药途径不同，需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及控制菌都将不同。【12】例如：口服给药中液体制剂需氧菌总数为102cfu/ml，霉菌和酵母菌总数为101cfu/ml，而控制菌方面则不得检出大肠埃希菌（1g或1ml）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙门菌（10g或10ml）。口腔黏膜给药制剂中鼻用制剂需氧菌总数为102cfu/ml，霉菌和酵母菌总数为101cfu/ml，而控制菌方面则不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml或10cm2）。耳用制剂需氧菌总数为102cfu/ml，霉菌和酵母菌总数为101cfu/ml，而控制菌方面则不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml或10cm2）。
本课题主要做的是依据2015版药典要求的三种自制制剂微生物检查方法验证。由于药典规定的微生物学检查方法仅是原则性的，实际工作中往往需要依据制剂工艺、配方、实验室条件、培养基配制情况等对一些参数进行灵活的调整，【13】【14】且向东【15】研究认为, 药品中污染的微生物处于不稳定状态, 微生物种类具有不确定性,在药品生产各个环节中, 微生物污染存在着不均匀性。所以在按照2015版药典对自制制剂微生物检查方法进行全面升标前必须进行验证实验。首先要准备5种标准菌株且要求为5代以内的传代培养菌株，按设定的参数制备供试液、菌液，确定检查计数方法，用平皿法【16】统计细菌、霉菌及酵母菌总数，实验中设置试验组、菌液组、供试液对照组，最后统计回收率【17】结果。对于控制菌的检查，则需要制备试验液，设置供试品对照组、试验组、阴性菌对照组、阳性菌对照组，确证该方法能专属地检测出相应的控制菌【18】。
我国在药品微生物检测工作中已经取得了较大的突破，但是仍存在一些地区的微生物检测实验室缺乏必要的硬件设施以及软件设备的现象，对于药品安全性的保障带来了一定的限制。大量研究结果显示，应用隔离器技术可以在最大程度上降低检测对操作人员的影响以及无菌检测过程中环境对微生物的影响。【19】该项技术我国目前仍处于普及过程中，可以预见该技术一定会成为未来药品微生物检验工作室中不可或缺的技术之一。除了技术的不断更新之外，同时也要不断提高检验人员的自身素质以及专业水平。在药品检验的过程当中，人工操作是不可避免的步骤，因此操作人员技术的高低则会对检测结果产生直接影响。【20】【21】此外，现如今药典中所规定的微生物限度标准提出过于宽松，而且对菌落计数也略有不妥，上述问题在一定程度上也会阻碍药品微生物检验良性发展。因此在规范药品微生物检验员专业水平的同时，也要不断加强对相关技术标准的改进完善力度，只有这样才能促进我国药品微生物检验工作得到持续进步，提高药品的安全性，减少用药安全事故。
