开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 实验背景
中药是我国劳动人民几千年来在与疾病作斗争过程中，通过实践，不断认识和积累的经验知识，对我国疾病防治和卫生保健发挥着重要作用。随着药学研究的深入和发展，中药的开发与利用受到越来越多的关注，目前已经有不少以中药为基础研制的药物进入临床使用。尽管中药在新药开发方面取得了一定的成就，但仍存在很多问题和困难，大多数药物有效成分和作用机理不明确，缺乏可靠的质量管理手段，这些方面都是限制中药发展的关键因素。而各种新的分析技术的出现为中药的研究提供了有效手段和广阔的思路，被应用到中药化学成分研究、中药鉴定、指纹图谱建立、质量控制、中药生产工艺现代化等方面，推动了中药学的发展，对中医药事业的进步具有极大意义[1]。我国是一个多民族国家，各民族在与疾病抗争、维系民族生存繁衍的过程中，创立了具有本民族特色的医药体系。海南黎族是世界上独一无二的少数民族，主要聚居在以五指山区为中心的海南岛中南部，特殊的地理位置和气候条件使海南岛成为生物多样性最为丰富的区域,据统计，海南岛有高等植物4500 种，特产近500 种[2]。黎族医药也因此具有明显的区域性和民族性特点[3]。
枫蓼肠胃康是海南著名黎药品种之一。其中枫蓼肠胃康片（保护品种号ZYB2072002238-1）和枫蓼肠胃康胶囊（保护品种号ZYB2072004057）均是国家中药保护品种。枫蓼肠胃康由牛耳枫和辣蓼组成，其中牛耳枫与辣蓼比例为2∶1，水煎煮，提取液浓缩加辅料后制剂而得，具有除湿化滞的功效，临床上用于治疗急慢性肠胃炎，效果显著且无不良反应。从20世纪90年代以来，研究人员对枫蓼肠胃康化学成成分、药理活性、临床应用开展研究，发现补身烷倍半萜类、黄酮类、有机酸类、生物碱类等化学成分，确定其具有保护胃粘膜、抗溃疡性结肠炎、抗炎镇痛、抗菌等活性[4]。牛耳枫是枫蓼肠胃康的君药,故黎药牛耳枫就有非常显著的研究价值。
牛耳枫，又名南岭虎皮楠、老虎耳，为交让木科(Daphniphyllaceae)交让木属(Daphniphyllum)植物牛耳枫(Daphniphyllum Calycinum Benth.)的全草。交让木属主要分布在热带亚洲，关于本属的种的分类学者有不同的观点。闵天禄(1980)在编写中国植物志时，认为本属约有30种，我国就有10种，有6种为我国特有种；2种与越南共有；其它2种交让木和虎皮楠，都分布于我国长江以南，并扩展至日本、朝鲜和俄属远东地区。牛耳枫，常绿灌木，高1～5m，单叶互生；叶柄长3～10cm，上部叶柄渐短；叶片宽椭圆形、长椭圆形倒卵形，长10～15cm，宽3.5～9cm，先端钝或近圆形，有时急尖，基部宽楔形或近圆形，全缘侧脉明显，下面有白色细小乳头状突起。夏季开花，花小，总状花序腋生，雌雄异株；花萼盘状，无花瓣；雄花梗较雌花梗长，花萼3～4片，雄蕊9～10；雌花花萼同雄花，子房为不完全的2室，花柱极短，柱头2分枝。核果卵圆形，长约1cm，被白粉。牛耳枫子为核果，卵圆形，广西个别地区曾误作鸦胆子销售，长7～10mm，直径5～6mm。表面蓝黑色，有时附有浅灰色粉末，具不规则皱纹或多数疣状突起，先端有短小2歧的柱头残基，基部有圆点状凹入的果柄痕，有时可见果柄和宿萼。果皮较薄而脆，易碎。种子1粒，棕色或棕黑色，不饱满。气微，味苦。牛耳枫多生于山间灌丛中或小溪两岸疏林中，分布于江西、福建、广东、广西、海南、云南等地，越南北部亦有分布。味辛苦、性平，常以根及叶入药，有清热解毒，活血舒筋之功效[5]。
由于牛耳枫化学成分研究的文献报道较少，而牛耳枫中所含的化学组分有生物碱及黄酮组分[6]。目前尚未见这两组分关于药理方面的研究，故本课题将进行关于牛耳枫生物碱和黄酮组分的药效研究。
二、实验目的和意义
由于牛耳枫的抗炎药效及其他药理方面的空白，我们还未能确定牛耳枫中究竟哪一组分起到的作用比较重要。在之前的研究中，已证明牛耳枫提取物对RAW 264.7小鼠巨噬细胞具有较好的抗炎活性。为进一步研究比较牛耳枫中生物碱组分和黄酮组分抗炎活性，本实验在提取物的基础上分离出生物碱组分和黄酮组分，借助RAW 264.7小鼠巨噬细胞炎症模型深入研究这两组分的抗炎药效，并通过测定相关炎症因子TNF-alpha;、IL-1beta;、IL-10和NO水平比较生物碱组分和黄酮组分的抗炎药效。通过上述研究，可为药品的方剂改良提供参考。
- 实验内容
研究流程：
- 牛耳枫中成分的提取:
称量牛耳枫药材300 g，置于5 L容量瓶中，80 %乙醇3000 mL加热回流2次，每次2 h，收集并合并2次提取液，得到总提取液约5600 mL。将提取液用旋转蒸发仪回收溶剂，制得浸膏。
- 生物碱组分和黄酮组分的分离：
浸膏分散悬浮于热水中，加1 mol·L－1H2SO4调节 pH =3，此酸性溶液用醋酸乙酯萃取，减压浓缩醋酸乙酯层液，制得浸膏，回收醋酸乙酯，得总黄酮。水层用 1 mol·L－1Na2CO3调节 pH =10，用三氯甲烷萃取此碱性溶液，减压浓缩三氯甲烷层，得总生物碱[7]。
