开题报告内容:
1.拟研究或解决的问题
a.建立生物样品中多种实验所用药物及示踪剂的检测方法,并进行方法学考证。建立相关动物实验模型,并进行考证。
b.通过体外及在体实验,研究肝损伤状态下血-视网膜屏障上P-GP、BCRP、MRP1等ABC转运体功能与表达的改变及引起此种变化的可能作用机制。
2.采用的研究手段
我们将通过在体实验和离体实验研究肝性视网膜病变状态下血-视网膜屏障上P-GP、BCRP、MRP1等ABC转运体功能与表达的变化。
用硫代乙酰胺和胆管结扎诱导肝损伤大鼠,“鸡尾酒”法给大鼠尾静脉注射特异性底物,采用HPLC、HPLC-MS等技术对生物样品进行含量检测;采用RT-PCR和Western blotting技术检测组织中转运体的mRNA水平和蛋白水平。用BRB细胞研究肝损伤大鼠血清、氨、胆红素、胆酸盐对上述转运体功能与表达的影响。
实验室中,通常采用HPLC、HPLC-MS等技术对生物介质中的不同物质含量进行检测,采用PCR、q-PCR技术对不同蛋白mRNA等表达情况进行检测,采用SDS-PAGE、Western blotting、Southwestern blotting、Immunochemistry等技术测定不同组织或细胞中蛋白质、多肽的分布、存在情况。
3.文献综述
黄疸是常见症状与体征,其发生是由胆红素代谢障碍而引起血清内胆红素浓度升高所致。因巩膜含有较多的弹性硬蛋白,与胆红素有较强的亲和力,故黄疸患者巩膜黄染常先于黏膜、皮肤而首先被察觉。实验室中通常采用胆管结扎(BDL)方法建立大鼠黄疸模型。
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