研究背景
多糖不仅是参与构成生命的基本物质，还具有构成细胞骨架，传递细胞间信号的功能，更重要的是多糖在体内的免疫调节，增强细胞抗肿瘤活性等方面有着重要的作用。大量研究表明，多糖具有抗氧化，抗炎，抗辐射等活性[1]-[4]。海洋生物中的活性多糖由于具有增强免疫功能、抗辐射、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛的生物学活性而受到人们的普遍关注[5]。海胆是一种低等的海洋无脊椎动物,属于棘皮动物门(Echinodermata)海胆纲(Echinoidea)。我国是海胆资源比较丰富的国家，常见的种类有球海胆科，刻肋海胆科，长海胆科和蛛网海胆科等等，共计有100多种[6]。雌海胆的生殖腺为名贵的海产珍品,被称为云丹,含有丰富的蛋白质、多糖、脂肪酸、维生素及各种微量元素等对人体有益的营养成分,因而海胆不但具有较高的食用价值,同时还有极好的药用价值,尤其对增强免疫力、防治心血管疾病有较好的效果[2]。国内外关于海胆活性成分的研究已经取得了一些进展[7],但有关海胆多糖及其抗肿瘤和抗病毒活性的研究尚未见报道。海胆黄多糖SEP是从光棘球海胆(Strongylocentrotusnudus)的卵中分离到的一种水溶性多糖,初步的体外活性实验表明SEP可显著地促进脾淋巴细胞的增殖，但至今为止没有针对海胆黄多糖的体内抗病毒活性实验。因此，我们需要对海胆黄多糖对体内病毒的抑制作用做出相关研究，本实验拟定检测海胆黄多糖对于HBV在体内复制抑制的机制及其研究。
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种常见且严重的慢性疾病，乙型肝炎病毒是一种包膜DNA病毒，可以对宿主免疫应答造成损害并且导致病毒细胞的持续存在以及慢性疾病的产生。全世界有超过3.5亿的HBV患者，每年有超过100万人死于慢性肝炎，肝硬化和由HBV感染引起的肝细胞癌。乙肝病毒和其他种类的病毒复制方式差不多，均需要依靠侵入宿主细胞进行复制。乙肝病毒复制需要乙肝病毒DNA聚合酶辅助进行，一旦缺少这种酶，乙肝病毒的复制就会停止。乙肝病毒的复制周期分为以下几步：首先是侵入和脱壳，HBV侵入人体之后，依靠其外膜（表面抗原，HBsAg）识别并粘附在肝细胞膜上，粘附成功之后，外壳脱落，侵入肝细胞中。然后是感染，HBV在肝细胞胞浆中脱落核壳（核心抗原HBcAg以及E抗原HBeAg），并释放HBVDNA进入肝细胞核。其次是发育和成熟，HBVDNA进入细胞核之后进一步发育完善形成HBV的共价闭合环状脱氧核糖核苷酸（HBV cccDNA），其包括了HBV所有的遗传信息，但由于肝细胞核表面有一层坚韧的核膜，药物一般不能穿过这层核膜，因此对于HBV的治疗一直处于研究阶段。最后是转录和翻译，乙型肝炎病毒（HBV）以cccDNA为模板，以宿主细胞内的核苷酸为原料进行转录并在宿主细胞中翻译，最后装配完成后开始感染下一个宿主细胞。乙型肝炎病毒(HBV)的基因组有4个开放读码区，S、O、P和X。S区又可分为S基因， 前S1和前S2基因，它们分别编码三种病毒外壳蛋白，即HBsAg,前S2和前S1蛋白[9][10]。前S2蛋白除了含有HBV白蛋白受体之外，还具有可以刺激产生抗S2抗体的抗前S2抗原[11]。目前已证明HBV白蛋白受体和病毒的复制以及肝炎的感染性有着密切的联系[12]，最近又有相关报道表明前S1蛋白对于附着于肝细胞和诱导特异性免疫应答也具有重要作用[13]。Neurath和Theilmann分别对前S2和前S1蛋白和HBV复制做了研究[14][15]，提出前S1相对于前S2蛋白在病毒的复制机制中有着更为重要的影响，并且这两种蛋白均可以作为病毒复制的指标[16]。而现有的药物所能达到的效果仅仅只有抑制和减缓HBV病毒在体内的复制，并不能真正意义上达到对其DNA片段进行破坏。目前，慢性乙型肝炎患者常用的治疗药物是干扰素和核苷类似物，如干扰素alpha;和拉米夫定。 然而，这些药物的临床疗效往往受其副作用和药物抵抗的限制。因此，迫切需要开发出高效低毒的新型抗HBV药物[8]。本实验拟先构造小鼠感染模型，后高压尾静脉注射不同剂量的SEP，饲养数周，分别监测不同时间段小鼠血清中HBeAg和HBsAg的表达水平，处死后取出肝组织检测肝组织中的HBV表达。最终研究不同剂量海胆黄多糖SEP对于HBV体内复制的抑制效果及机制。
研究手段
1.首先构建HBV感染小鼠模型
饲养60c57只小鼠，至体重达到20-22g，高压尾静脉注射15gHBV质粒，构建长期感染HBV的小鼠模型。
构建一周后对小鼠进行眼眶取血，检测小鼠血清中HBeAg或者HBsAg的表达水平。
2.检测海胆黄多糖SEP对小鼠体内HBV复制的抑制效果
将60只小鼠按照以下类别分为6组，1组10只。
