一、课题背景
药品中的残留溶剂是指在原料药、辅料以及制剂生产中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机挥发性化合物。在原料药合成工艺中，选择适当的溶剂可提高产量或决定药物的性质，如晶型、纯度、溶解速率等。因此有机溶剂在药物合成反应中是必不可少和非常关键的物质。当药品所含的残留溶剂水平高于安全值时，就会对人体或环境产生危害。因此，控制药物中的残留溶剂是保证上市药品安全的重要研究内容之一。根据ICH，甲醇的溶剂残留限度为3000ppm。
中国药典检查药物中残留有机溶剂采用的方法多是气相色谱法。气相色谱的原理是利用试样中各组份在气相和固定相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。气相色谱法具有检测灵敏度较高，选择性较好的特点，采用此法所需的样品用量较少，基本可以满足所有残留溶剂测定的要求。
本实验采用气相色谱法，建立药物中甲醇残留的分析方法，并对该方法进行验证。
- 要解决的问题
- 筛选色谱柱，确定分离药物中甲醇残留的色谱条件。
- 对开发的分析方法进行验证。
- 计算出药物中的甲醇残留量。
- 研究方法和内容
1色谱条件
1.1
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色谱柱 |
DB-624（30mtimes;0.32mm，1.8mu;m） |
|||
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进样口温度 |
80℃ |
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分流比 |
10:1 |
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检测器温度 |
250℃ |
|||
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载气 |
氮气 |
|||
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载气流速 |
1.2mL/min |
|||
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柱温 |
速率（℃/min） |
温度（℃） |
保持时间（min） |
|
|
1 |
80 |
2 |
||
|
2 |
30 |
250 |
4.5 |
|
2溶液配制
2.1空白溶液
空白溶液为DMSO溶液
2.2对照品溶液
2.2.1对照品储备液：称取200mg甲醇加入预先装有少量稀释剂的20mL容量瓶中，溶解定容摇匀。将1mL转移到100mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度线，摇匀。储备液浓度为100mu;g/mL。
2.2.2标准对照品溶液：将2.2.1中溶液转移3mL至10mL容量瓶中，稀释剂稀释至刻度线，摇匀，浓度为30mu;g/mL。
2.3供试品溶液
精密称取100mg样品,加入10mL容量瓶中，加溶剂溶解定容摇匀，平行配两份，供试品溶液浓度为10mg/mL。
3方法学验证
3.1专属性：取空白溶液，对照品溶液进行色谱分析。观察色谱图中溶剂峰处是否有干扰，对照品分离度、灵敏度是否达到要求。
3.2线性和范围：精密量取2.2.1项下的对照品储备液1,2,3,4,5,6mL,分别置于10mL容量瓶中，加DMSO溶液稀释至刻度线，摇匀，即制成浓度为10mu;g/mL,20mu;g/mL，30mu;g/mL,40mu;g/mL，50mu;g/mL的线性系列测试溶液，倒入进样小瓶中进样分析，得到色谱图。以各对照品测得的峰面积 (x) 为横坐标、对照品的质量浓度 (y) 为纵坐标进行线性回归。相关系数r大于0.99。
3.3检测限（LOD）和定量限（LOQ）：
3.3.1检测限：根据3.2中色谱图，以信噪比为3确定被分析物可被准确地检测的最小浓度。
3.3.2定量限：根据3.2中色谱图，以信噪比为10确定被测物能够准确定量的最小浓度。
3.4精密度
3.4.1重复性：取对照品溶液6份，按照1.1项下色谱条件进样分析。以峰面积计算甲醇的RSD值，RSD值在5%以下重复性较好。
3.4.2中间精密度:取对照品溶液6份, 在不同日期内, 按照1.1项下色谱条件进样分析，计算RSD。
:标准偏差，
3.5准确度（回收率）
取供试品（已知残留溶剂含量）100mg，精密称定，精密量取标准储备液，加水稀释，制得相当于各溶剂检查限度50%，100%，150%的溶液，倒入进样小瓶中，依法测定。回收率应在90%-110%。
4样品测定与计算（外标法）
外标法：外标法是指按梯度添加一定量的标准品(对照品)于空白溶剂中制成对照样品，与未知试样平行地进行样品处理并检测。不同浓度的标准品进样，以峰面积为值绘制成标准曲线，从而推算出未知试样中被测组分浓度的定量方法。
步骤：取2.3项下供试品溶液两份倒入进样小瓶中按1.1项下的色谱条件进样分析，以外标法计算甲醇残留量。
外标法计算公式：
:样品峰面积
:对照品峰面积
:样品浓度
:对照品浓度
- 工作计划
2月28日—3月17日 实验准备阶段：确定课题，查阅相关资料文献、完成开题报告。
3月18日—4月15日 实验前期阶段：研究测甲醇残留的色谱条件，完成方法开发方法验证，对方法进行条件优化。
4月16日—4月30日 实验后期阶段：进行实验，处理色谱图数据。
5月01日—5月20日 整理实验数据和结果，撰写毕业论文，准备毕业答辩。
[参考文献]
- 邱宣,王爱迪.顶空气相色谱法测定罗氟司特原料药中残留溶剂的含量[J].应用化工,2013,42(08):1541-1543.
- 陈盼盼,刘璇,王丹华,王宏亮.顶空气相色谱法检测原料药氯沙坦钾中的残留溶剂[J].中国现代应用药学,2017,34(07):1015-1017.
- 陈爱瑛,徐世芳,姜丽霞.顶空气相色谱法测定氟孕酮中有机溶剂残留量[J].中国现代应用药学,2008,(S2):721-723.
- 赵翠丽. 气相色谱法在药物残留溶剂测定中的应用研究[D].河北：河北医科大学,2016.
- 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]. 北京：中国医药科技出版社 ,2020:
- 胡慧廉.顶空气相色谱法测定氟尼辛葡甲胺原料药中有机溶剂残留量[J].色谱,2012,30(01):99-102.
- Quality control in residual solvent analysis: the static headspace gas chromatographic method[J] . Berta Iosefzon-Kuyavskaya. Accreditation and Quality Assurance . 1999 (6).
一、课题背景
药品中的残留溶剂是指在原料药、辅料以及制剂生产中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机挥发性化合物。在原料药合成工艺中，选择适当的溶剂可提高产量或决定药物的性质，如晶型、纯度、溶解速率等。因此有机溶剂在药物合成反应中是必不可少和非常关键的物质。当药品所含的残留溶剂水平高于安全值时，就会对人体或环境产生危害。因此，控制药物中的残留溶剂是保证上市药品安全的重要研究内容之一。根据ICH，甲醇的溶剂残留限度为3000ppm。
中国药典检查药物中残留有机溶剂采用的方法多是气相色谱法。气相色谱的原理是利用试样中各组份在气相和固定相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。气相色谱法具有检测灵敏度较高，选择性较好的特点，采用此法所需的样品用量较少，基本可以满足所有残留溶剂测定的要求。
本实验采用气相色谱法，建立药物中甲醇残留的分析方法，并对该方法进行验证。
- 要解决的问题
- 筛选色谱柱，确定分离药物中甲醇残留的色谱条件。
- 对开发的分析方法进行验证。
- 计算出药物中的甲醇残留量。
- 研究方法和内容
1色谱条件
1.1
