开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题的背景及意义
骨钙素（Osteoca1cin,OC）是一种小蛋白质（分子量为5800道尔顿），组成了骨骼中非胶原蛋白的10-20％，也是人体中最丰富的蛋白质之一。这种蛋白质是在骨骼组织中由成骨细胞从头开始合成的，与骨骼矿化的发生相吻合，其中也有少量参与到血液循环中。骨钙素在循环中的变化与骨的更新密切相关，是重要的骨转换标志物之一。其本身并没有控制骨骼代谢的功能，但是能够反映骨骼的代谢活性。测定血清或血浆中的骨钙素对于研究成骨细胞的活性，了解某些疾病如骨质疏松症时骨的代谢状态有重要的意义。
骨钙素分子量较小，可以将其偶联到大分子的载体上，如：BSA、PVP或KLH，以加强免疫原性。用其免疫动物后可以制备出单克隆抗体和多克隆抗体，应用于骨钙素的检测。
本课题的性质为基础研究，将对骨钙素抗原的制备方法进行探究，并验证其活性。
- 研究方法
- 文献资料法：通过查阅相关中外文文献，了解骨钙素抗原的制备方法，以及分离纯化过程中各步骤所需要的条件、试剂和注意事项。在与老师沟通交流下，初步整理出实验室研究阶段最为适用的的提纯路线，为具体的制备阶段提供基础。
- 实验法：在前述的具体的制备路线的基础之上，在实验室完成骨钙素的分离纯化，做好实验记录，同时记录好反应过程中出现的现象与问题。对制备的骨钙素进行活性的验证。
三、文献综述
本次文献的查找主要通过互联网，所查寻的文献来自于中国知网CNKI平台、维普中文期刊服务平台和万方医学网平台。现将骨钙素研究现状及拟制备方法分别进行简述：
- 骨钙素研究现状
骨钙素是迄今为止研究得最为深入的一种骨代谢标志物，由成骨细胞合成，也可由成牙质细胞、增生的软骨细胞合成，大部分沉积于骨细胞外基质中，少量进入血液循环，是一种反映成骨细胞活性的敏感而特异性的标志物，其血清水平反映了骨形成的速率。骨钙素有两个主要的结构：G1a螺旋是一种严谨性的钙离子依赖性alpha;-螺旋构象，G1a残基使钙离子结合位点凸出构象区，易于与羟磷灰石吸附结合；羧基端beta;转角是与细胞受体和细胞外蛋白结合的位点。
骨钙素的生物学功能不明确，其化学结构指示其可与羟磷灰石结合。早期的研究证明，骨钙素的出现与骨矿物化作用的启动相一致，同时，骨钙素的增长与骨骼系统生长期羟磷灰石的沉积有关。骨钙素在矿物化作用后保持较高水平状态，这表明骨钙素可能在某种程度上起到了限制骨骼矿物化的作用并参与骨代谢的调节。骨钙素含有三个基因簇，OG1和OG2编码的骨钙素96%序列同源，仅在成骨细胞中表达，骨钙素相关基因ORG仅在肾脏中表达。删除OG1和OG2序列的基因敲除小鼠骨钙素合成缺乏，骨形成增加，而骨吸收并不平行增长，骨的矿物化过程也不受影响，最终导致骨质增生。所以，骨钙素实际上是骨形成的一个限定性的因素,其正常功能是限制骨形成。此外，骨钙素与破骨细胞对骨的吸收，激活或趋化性也有关系。骨形成率增长时成骨细胞无堆积现象，故骨钙素可能是通过特定的受体起作用的。因此可以认为，骨钙素并非骨形成的特异性标志物，而是与骨形成和骨吸收均相关的反映骨改建状态的一种标志。
儿童较成人血清骨钙素水平高，成人骨钙素水平相对较稳定，女性60岁以后开始升高，不同人种间有一定的差异。骨钙素分子量较小，可从肾脏滤过和降解，血清骨钙素水平易受肾功能的影响，肾小球功能受损时血清骨钙素水平升高。骨钙素水平与月经周期有关，黄体期最高，妊娠1-6个月骨钙素水平降低,分娩后恢复正常。
- 骨钙素拟制备方法
2.1骨粉的制备
