论文题目：红景天苷对LPS诱导巨噬细胞炎症损伤的保护作用
关键词：红景天苷, LPS, 炎症
课题意义：
红景天苷，能够抑制由脂多糖与巨噬细胞上的 Toll 样受体结合后激活巨噬细胞，从而释放的多种能诱导炎症发生的细胞因子和炎症介质。本论文将参照《新药审批办法》新药药理、毒性研究的技术要求，结合国内外相关研究资料，以脂多糖刺激小鼠巨噬细胞活化的细胞为体外模型，研究红景天苷对炎性细胞因子 TNF-alpha;、IL-1beta;、IL-6 分泌的影响。本课题拟研究将提供合理的临床实验数据来测定是否红景天苷对炎症的治疗功效。
方法：
在体外实验中，利用LPS刺激小鼠单核-巨噬细胞建立的体外炎症反应模型，通过以下几个方面来评价红景天苷的细胞毒性：（1）红景天苷对 LPS 诱导巨噬细胞分泌炎性细胞因子（TNF-alpha;、IL-6、IL-1beta;）影响。（2）红景天苷对 LPS 诱导的巨噬细胞 TNF-alpha;，IL-1beta;，IL-6 mRNA 表达的影响。（3）红景天苷LPS 诱导的炎症信号转导通路NF-kappa;B的影响。实验中，利用MTT 法测定红景天苷的细胞毒性，ELISA 测定细胞因子 TNF-alpha;，IL-1beta;、IL-6 的浓度，Western blot 法检测蛋白质，并利用PCR反应和凝胶电泳、凝胶成像。红景天苷的终浓度分为 低、中、高三个单药组，或每孔分别加入 1mL不同终浓度红景天苷和 LPS（1mg/L）的混合液（组合红景天苷组），并设 LPS 组（终浓度 1mg/L 的 LPS）和空白对照组（只加营养液）。
文献综述：
细菌快速生长过程或死亡后均可释放脂多糖。进入血流的脂多糖可来自各种外源性革兰氏阴性菌感染，亦可来自机体抵抗力低下时的肠源性革兰氏阴性菌。当机体受到革兰氏阴性细菌感染时，脂多糖作用于体内多种细胞如巨噬细胞、平滑肌细胞、内皮细胞等实质细胞的细胞膜上受体，从而激活细胞内炎症信号通路，导致细胞核内相关炎症因子或介质的基因表达发生变化，刺激合成和释放众多内源性生物活性因子，包括干扰素、肿瘤坏死因子(TNF)、前列腺素、凝血素、白细胞介素IL-1、IL-6、IL-8、血小板激活因子等。这些因子适量时可激活免疫系统，增强固有免疫功能，但是过量刺激则可导致宿主细胞因子失控性表达，引起机体严重的病理生理反应，表现为发热、低血压、心动过速、严重感染、多脏器损伤、败血症休克、弥散性血管内凝血(DIC)、多器官功能障碍综合征(MODS)、甚至死亡
NF-alpha;、IL-l、IL-6是具有多种生物活性的重要前炎细胞因子，在炎症反应中起至关重要的作用。TNF-alpha;主要由巨噬细胞产生，并通过特异性细胞膜连接受体发挥作用。脂多糖是诱导TNF-alpha;产生的最有效刺激剂，当巨噬细胞被脂多糖刺激30-90分钟后, 就会产生TNF-alpha;，发生炎症级联反应，从而产生前炎细胞因子和炎类介质等。与IL-1相比，TNF-alpha;在炎症反应初期有较强的致炎作用。IL-1由有核细胞产生的，有IL-lalpha;和IL-1beta;两种存在形式，由LPS激活的外周血单核细胞主要分泌IL-1beta;。其主要生物学作用为抗原递呈细胞（APC）协同刺激，使T细胞和B细胞增殖分化以及炎症和全身反应等。IL-6 是一种多功能细胞因子，血液中活化的单核巨噬细胞是其主要来源。它也是启动全身性炎症反应最强的细胞因子，能够诱导T细胞和B细胞的增值分化，刺激肝细胞产生急性期蛋白等，通过级联反应使炎症作用放大。但IL-6具有负反馈调节作用，在浓度升高的情况下，抑制TNF-alpha;的合成，阻断IL-1受体，从而减轻炎症反应。IL-1可以通过刺激下丘脑体温调节中枢，促使前列腺素E2(PGE2)大量合成和释放，致使机体产热增加，散热减少，体温升高。在炎症反应过程中，PGE促进血管通透性增加及水肿，并提高痛觉感受器对致炎物质的敏感性，起到对疼痛的放大作用。
结果预测：
