姓名

石越

学号

1346229

专业

中药资源与开发

指导教师

胡军

课题名称

不同固体培养基对猴头菇菌丝生长的影响

课题性质

基础研究 radic; 应用课题 设计型 调研综述 理论研究

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

目的意义：

猴头菇是担子菌门伞菌纲红菇目猴头菇科猴头菌Hericium erinaceus (Rull ex F.) Pers.的子实体，是一种珍贵的药、食两用真菌，在食品和医药领域都有着重要的地位。猴头菇味道鲜美，与熊掌、燕窝、香菇齐名为四大山珍。猴头菇性平，味甘，利五脏，助消化；其主要成分有多肽、氨基酸、多糖、萜类、甾醇类化合物等，具有提高免疫力、降血脂、抗肿瘤、抗衰老等功能，深受市场欢迎。

猴头菇人工栽培目前主要以固体培养料袋装培养为主，猴头菇属木材腐生菌，栽培中最常用的主要原料是木屑，并适量加入麸皮、玉米粉等辅助原料配制而成，而木屑资源随着生长量减少，需求的扩大，逐年紧张。猴头菇品质及产量与猴头菇菌丝质量的优劣及其生长速度密切相关，本实验通过利用锯木屑，豆秸，玉米芯，花生壳等农业废弃物，适当加以辅料，配制成不同的固体培养基，以菌丝满袋时间，生长势以及接种满袋前后重量差异为指标，对比不同培养料配方对猴头菇菌丝生长的影响，通过采用不同接种方式对猴头菇菌丝生长的影响评估，优化猴头菇的固体培养基配方及接种方式，以充分利用资源，减少工作量，缩短培养周期，提高猴头菇猴质量和产量。

本项目具有以下几个方面的意义：其一，充分利用农业废弃物，减少环境污染，降低木屑资源的消耗；其二，降低生产成本，简化生产工艺，提高猴头菇品质和产量；其三，通过对比这些农业副产品作为主料对猴头菇菌丝生长的影响，能为不同地区猴头菇生产选择何种主料、辅料作为培养基提供依据，有着一定的应用价值。

实验仪器及材料：

1、材料

1.1、供试菌株

猴头菇菌株，由中国药科大学药用植物园提供。

1.2、栽培袋。聚丙烯塑料袋17cm*33cm。

1.3、培养基

菌种活化培养基：PDA培养基（马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂2%）

液体培养基：葡萄糖2% ，蛋白胨0.15% ，马铃薯20% ，磷酸二氢钾0.2% ，硫酸镁0.1% ，VB₁ 10mg/L

固体培养基：葡萄糖2% ，蛋白胨0.15% ，马铃薯20% ，磷酸二氢钾0.2% ，硫酸镁0.1% ，VB₁ 10mg/L，琼脂0.5%

供试培养基：见表1 不同固体培养基配方组成

表1 不同固体培养基配方组成

1.4、主要仪器

电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养室、水浴摇床、粉碎机

实验方案：

1、培养料处理

将阔叶木屑，豆秸，玉米芯，花生壳和麦麸用粉碎机粉碎，提前1d预湿软化，发酵后备用。

2、猴头菇菌种活化

配置PDA培养基，灭菌后放置在37℃温箱培养24h，无菌生长者用来接种。取菌种无菌条件下接种于PDA培养基，22~25℃培养5d。

3、液体菌种的制备

配置液体培养基，无菌条件下，在PDA培养基中生长有菌丝的培养基上取适量新鲜斜面菌种接种于液体培养基中，在25℃下150r/min摇床培养3d备用。

4、固体菌种的制备

配置固体培养基，无菌条件下，在PDA培养基中生长有菌丝的培养基上取适量新鲜斜面菌种接种到固体培养基中央，22~25℃避光培养。

5、供试培养基筛选

供试培养基按照表1 中不同配方比例配置装入栽培袋中，每袋装料约1kg，配方1先装料10袋，不接种，作为空白对照组。配方1~10再分别装料6袋进行接种，重复3次实验，共计190袋。灭菌（121℃，1.5h），冷却至25℃以下人工接种，在相同接种条件下，用改良无菌注射器取液体培养基中的种子液2ml注入栽培袋。接种后的栽培袋和未接种的栽培袋都转入恒温培养室，在温度23℃、湿度75~85%、CO2浓度1000~1500ppm、空气阀开闭度30~60%、风速开闭度30~60%下发菌。统计不同配方下菌丝满袋时间，平均生长速度，生长势，污染率等指标并填入表2 不同培养料配方对猴头菇菌丝生长的影响。在接种后当天将190袋栽培袋从1到190编号，并重复测量三次袋重，取平均值，在菌丝满袋当天再次重复测量三次袋重，取平均值。将两次测定数据相加减，进行方差，平均数计算，并将配方1中的6袋接种的实验组与10袋未接种的空白对照组作差异显著性分析，结合前面的实验数据，判断接种与否与袋重变化是否具有显著性差异以及袋重变化与菌丝质量优劣是否具有定性关系。

表2 不同培养料配方对猴头菇菌丝生长的影响

6、接种方式对比

接种方式按照表3 不同接种方式对猴头菇菌丝生长的影响中进行接种，以配方1为接种袋，每种方式装料6袋，重复3次实验，共计72袋，每袋装料约1kg，灭菌及培养条件同上。统计不同接种方式下菌丝满袋时间，平均生长速度，生长势，污染率等指标并填入表3。在接种后当天将72袋栽培袋从1到72编号，并重复测量三次袋重，取平均值，在菌丝满袋当天再次重复测量三次袋重，取平均值。

表3 不同接种方式对猴头菇菌丝生长的影响

备注：方式1：液体接种。用改良无菌注射器取液体培养基中的种子液2ml注入栽培袋。方式2：固体表面接种。在与固体培养基中央距离相同的生长有菌丝的培养基上切块，取约2cm²，接种到栽培袋开口物料表面。

方式3：固体中心接种。在与固体培养基中央距离相同的生长有菌丝的培养基上切块，取约2cm²，接种到栽培袋中心。

方式4：固体表面和中心同时接种。在固体表面接种约1 cm²，在固体中心接种约1 cm²。

工艺路线:猴头菇保藏菌种PDA活化培养液体及固体培养不同固体培养基筛选和接种方式对比结果分析