开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、拟研究或解决的问题
通过细胞体外实验初步建立筛选PD-1/PD-L1小分子化合物的模型。
二、采用的研究手段
实验材料
1、细胞培养板、分离培养T细胞所需培养基
2、Elisa试剂盒、HTRF检测试剂盒以及检测所需的酶标仪仪器
3、小分子抑制剂化合物、BMS公司专利WO2015160641中的化合物1016(BMS-1016)作为对照品药物
实验方法
通过分离培养T细胞,并以HTRF试剂盒检测加入PD-1抑制剂后,酶标仪检测HTRF供体的激发触发朝向HTRF受体的荧光共振能量转移,HTRF受体在665nm处的发射荧光,该信号与PD-1/PD-L1相互作用的化合物或抗体将导致HTRF信号的减少;通过Elisa试剂盒检测T细胞效应分子IL-2和IFN-gamma;的表达来预测PD-1小分子化合物与T细胞、肿瘤细胞的共孵育后的效应;通过用SRB方法检测T细胞与不同浓度的化合物的共孵育后的细胞活力变化,通过统计学分析,筛选出有效的PD-1/PD-L1小分子化合物并初步建立筛选模型。
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