开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题研究内容
构建一种干扰血管生成素样蛋白8（Angiopoietin-like protien, ANGPTL8）基因表达的腺相关病毒载体系统，设计并合成ANGPTL8 shRNA，应用分子生物学方法将腺相关病毒(Adeno-associated Virus，AAV)载体与shRNA相结合，构建AAV8-ANGPTL8 shRNA表达质粒，转染至HEK-293T细胞中，包装生成携带ANGPTL8 shRNA的重组腺相关病毒。之后尾静脉注射病毒通过血液循环进入小鼠肝脏，进行后续ANGPTL8干扰效率的检测。由于其安全性高，免疫原性低等特点，重组病毒适用于体内实验，这一实验有助于研究ANGPTL8在机体内对于脂肪代谢作用。
- 研究方法
1. 设计小鼠ANGPTL8干扰序列并进行干扰效率的验证，选取最佳的干扰序列；
2. 以肝脏特异性AAV8型骨架载体构建AAV8-ANGPTL8 shRNA载体及对照AAV8-Control shRNA载体；
3. 以AAV8-ANGPTL8/NC shRNA 载体为基础通过三质粒共转(病毒骨架质粒，病毒包被质粒，辅助病毒质粒)HEK-293T细胞的方式生产AAV8病毒；
4. 尾静脉注射小鼠并进行后续ANGPTL8干扰效率的检验。
- 论文课题研究进度安排
2019.2.9-2019.2.28 完成ANGPTL8干扰序列的设计及干扰效率的验证；
2019.3.1-2019.3.31 完成AAV8包装载体的构建及质粒的提取；
2019.4.1-2019.4.30 熟练HEK-293T细胞的培养及病毒的生产；
2019.5.1-2019.5.28 掌握病毒滴度的检测及体内作用效果的验证，完成论文写作。
