开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 课题研究内容
本课题准备设计并体外转录合成具有一定稳定性的vanin-1 mRNA,对其表达进行初步验证。在pGADT7载体T7启动子之后加上vanin-1序列以构建模板质粒,预计研究步骤有克隆菌的转化及质粒的提取,在目的序列测序验证后,体外转录合成vanin-1 mRNA,同时进行mRNA浓度及片段大小的测定,之后进行细胞及动物上的实验来检测vanin-1 mRNA表达。由于体外合成的mRNA的安全性、稳定性更有优势,不会引入基因突变,mRNA可以被正常细胞降解,对于研究vanin-1在脂肪代谢等中的作用有所裨益。
- 研究手段
1.构建目的载体,导入感受态细菌中,并通过琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定。
2.Vanin-1 mRNA体外合成,先将质粒模板线性化,利用mMESSAGE mMACHINE kit试剂盒体外转录合成vanin-1 mRNA,再进一步鉴定纯化。
3.将体外合成的vanin-1 mRNA进行细胞及小鼠实验,检测分析其表达。
- 论文课题研究进度安排
2019.03-2019.04 vanin-1序列的合成及目的载体构建,克隆菌的转化及质粒载体的提取鉴定。
2019.04-2019.05 vanin-1 mRNA的体外合成、纯化及转染。
2019.05-2019.06 vanin-1 mRNA在小鼠体内的表达。
- 文献综述
近年来,随着现代人生活水平的提高,人们的生活方式发生了翻天覆地的变化。这其中又包含了诸多不健康的生活方式,包括饮食偏好(暴饮暴食、高糖高盐饮食、饮食无规律、吃油炸腌渍类食物等),睡眠习惯(熬夜、昼夜颠倒等),运动方式(久坐,不动或少动)等。这些生活习惯都会深远而广泛地损害机体正常代谢,久而久之就会引起肥胖、高血脂、糖尿病、心脑血管疾病等代谢性疾病。
