开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题解决的问题
补骨脂是豆科一年生直立草本植物 Psoralea corylifolia L． 的干燥成熟果实，有补肾助养、补脾健胃的功效，其应用十分广泛，常用中成药中含有补骨脂的超过 30 种之多。但近年来随着补骨脂的临床使用日益广泛，其安全隐患逐渐显现，补骨脂及含补骨脂的知名壮骨中药如壮骨关节丸和仙灵骨葆的肝损伤不良反应日益受到重视[1-2]。药典中并无关于补骨脂毒性的详细记载，现今，补骨脂的毒性研究主要采用大鼠、小鼠在体模型或体外肝、肾细胞等模型[3]。研究对象主要为补骨脂及不同炮制品，以及补骨脂素和补骨脂酚等成分[4]。然而补骨脂导致肝脏毒性的原因一直未能明确，其中的肝毒性成分不甚明了。
目前，关于导致中药潜在肝毒性的成分和毒性机制等方面的认识取得了一定的进展，更科学全面的认识还处在更深一步的研究之中。现有体内、外毒性模型无法兼顾在体与高效评价：哺乳动物安全性评价耗时长、成本高、劳动强度大，不适于高效筛选；体外细胞模型环节单一，无法体现在体效果。近年来，新型模式生物斑马鱼进入了人们的研究视野。斑马鱼( zebra fish) 为常见热带鱼类，是最常用的模式生物之一。最初，斑马鱼被作为一种监测水质环境的动物模型，用于水体中致畸物和有毒物质的监测。1981年，美国学者Streisinger等[5]在Nature杂志上发表了开创性的斑马鱼纯合二倍体克隆的工作，首次将斑马鱼引入遗传和发育生物学领域，自此斑马鱼被广泛应用于该领域相关科学研究。斑马鱼作为模式生物的优势十分明显。它们体形微小，不占用空间，与大鼠或小鼠相比饲养更为方便，可于微板中实验。其次斑马鱼的繁殖周期短，交配无季节性，产卵数多，胚胎发育迅速，受精后24小时即可完成身体内部器官的构建，且胚胎透明易于观察。此外，斑马鱼和人类基因有着87%的高度同源性，这意味着其实验结果大多数情况下适用于人体，适合人类疾病模型的构建与新药筛选等研究领域[6]。
本课题用斑马鱼模型高效评价补骨脂水煎液及不同浓度醇提物安全性，结合中药特征图谱分析筛选，以期明确补骨脂的毒性根源，为深入研究其毒性物质基础提供实验据，为应用模式动物斑马鱼进行中药复杂体系毒性高效筛选提供参考。
- 研究方法
（1）制备补骨脂不同溶剂提取物（水，30%，50%，70%，100%醇提物）。
（2）将上述五种补骨脂提取物配液，并设置DMSO对照组与空白对照组，给药斑马鱼，通过斑马鱼模型，计算各组的半数致死量（median lethal dose， LD50）。
（3）采用HPLC法将不同组的提取物进行定量分析。
（4）分析补骨脂特征图谱，采用PCA，PLS-DA等化学计量学方法分析差异化合物，推测毒性成分。
- 文献综述
- 补骨脂的化学成分研究
补骨脂中含有多种活性成分，到目前为止，补骨脂中已经分离出香豆素类、黄酮类 、单萜酚类，以及豆甾醇、谷甾醇葡萄糖苷，十三烷、棉子糖等化合物四十余种[7]。其中，香豆素类及黄酮类化合物是其主要活性成分。如今，随着对补骨脂的不断深入研究，已有更多更新的活性成分被发现，其所具有的生物活性也将不断被开发利用。
从化合物的含量上看，补骨脂中化合物以香豆素类为主。1995—2010版《中华人民共和国药典》一直以补骨脂素、异补骨脂素为质控指标。有关补骨脂素和异补骨脂素的提取工艺， 已有不少人进行了深入研究。超临界CO2萃取技术和回流提取法均可以较好提取补骨脂中的化学成分[8]。其中有研究回流法提取补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取量是超声法提取量的186.36%，但回流法得到的提取液较超声波法得到的浑浊，难过滤，而超声法得到的提取液中油脂及糖类杂质较少，易滤过并滤液较澄清，因此，应根据实际需要选择补骨脂的提取方法。
