开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 选题背景
近年来,随着中草药在全球范围内的广泛传播和应用、国家药品不良反应监测体系的不断完善以及民众对药品不良反应关注度的大幅提高,中药相关不良反应事件的报道呈升高趋势,特别是一些传统不认为有毒的中药也发生了不良反应,对中药的临床安全用药造成了一定的负面影响。其中临床常用的含蒽醌类成分中药如大黄、何首乌、芦荟、番泻叶以及决明子、柴胡、麻黄等都被报道有临床肝损害问题,引起国内外药监部门普遍关注和重视。2001年美国NIH组织发现蒽醌类成分之一大黄素具有肝肾毒性; 2014 年国家食品药品监督管理总局药品不良反应中心公开通报口服何首乌及其成方制剂引起的肝损伤风险，并要求相应厂家根据品种实际和不良反应监测情况完善药品说明书的安全性信息等。2006年MHRA(Medicinesand Healthcare Products Regulatory Agency)发布含何首乌制剂的肝损害警告信息。
何首乌（Polygonum multiforum Thunb）为补虚药的一种，生何首乌性平，味甘、苦，归心、肝、大肠经; 具有解毒、消痈、截疟、润肠通便的功效。制何首乌性微温，味甘、涩，归肝、肾经; 具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨、化浊降脂等功效。何首乌的主要活性成分有二苯乙烯苷、蒽醌、鞣质、磷脂和多糖等，可用于抗氧化、抗癌、保肝、调节血脂、抗病毒等。何首乌是传统补益类中药，与人参、灵芝和冬虫夏草并列为祖国“四大仙草”。唐代的《何首乌传》里曾经这样描述到：服用何首乌可以使人长寿，年龄超过120岁。并且明代有史料记载嘉靖皇帝服食制首乌连生皇子。因此大家会受这些历史故事的影响，相信何首乌是滋补以及延年益寿的佳品。然而随着何首乌的应用日益广泛，往往会伴随一些不良反应出现。近几年不断报道出，服用何首乌会出现口干、头晕、精神恍惚、四肢颤抖、慢性肠炎、过敏等一些不良反应，并且在使用的过程中偶尔会伴随一些肝毒性的发生。而关于何首乌肝毒性的频发趋势更是愈演愈烈，近来，国内外不断有文献报道因服用生、制何首乌或含何首乌相关制剂而导致黄疸、肝炎和肝功能异常等患者。
大黄也是临床常用中药,为蓼科植物掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特大黄RheumtanguticumMaxim.exBalf.或药用大黄RheumofficinaleBaill的根及根茎,因其疗效确切、功效众多被列为“药中四维”,是典型的多功效中药。传统对大黄多功效的认识如《神农本草经》曰:“下瘀血,血闭,寒热,破症瘕积聚,留饮宿食,荡涤肠胃,推陈致新,通利水谷,调中化食,安和五脏”。现代临床应用大黄,主要用于便秘、慢性肝炎、肝纤维化、黄疸、慢性肾衰、上消化道出血,也有用于糖尿病、高血脂、脂肪肝等多种代谢性疾病。然而最近国内外偶有报道大黄所含蒽醌类成分存在肝肾毒性和潜在的致癌的风险。
何首乌是一种常用补益药物,在处方药、非处方药、保健食品以及普通食品均应用颇广。近年国内外关于何首乌引起不良反应的报道却逐渐增多,尤其是导致的肝损伤问题受到高度重视。目前的主流观点认为何首乌的肝毒性物质基础为蒽醌类成分。而同样含大量蒽醌类成分的大黄导致肝毒性损伤的报道却不是太多。因此借助实验研究通过观察肝损伤的相关性指标来比较大黄和何首乌的肝毒性大小。
中药成分的复杂性、中药配伍的变化性、中医的辨证论治等特征以及不同制剂工艺或剂型对疗效的影响，都在一定程度上造成了中药毒性研究的困难，且大多数有毒中药和常用中药的毒性成分远未弄清；有毒中药和常用中药的毒性靶器官、安全剂量范围、有效剂量与最小有毒剂量、量-毒效应范围等并不完全明确。实验室常用动物模型之一的斑马鱼发育比较快、易于实验室饲养、发育周期短、实验费用低、为长期毒性研究提供大量的动物模型；斑马鱼每周可以产卵 1 次，数量多且不受季节的影响，为实现高通量筛选提供条件；斑马鱼体积小，可以在 96 孔板中给药，所需要的药量比哺乳动物少；斑马鱼特别是发育早期的斑马鱼，胚胎透明，在显微镜下可以清楚地观察到各个发育阶段的内部器官和结构，以及药物所致的畸形等现象，在毒理学实验中这种直接观察靶器官的方式可获得多角度实验资料，便于评价毒理学实验的终点；斑马鱼的基因组和人类相似度高达87%；人类体内具有重要功能的基因或者小分子在斑马鱼体内也能找到，特定药物和化合物在斑马鱼胚胎和幼鱼体内也发生较强的生物积累、异源物质代谢和生物转化，这些特征也是毒性评价中重要的方面。且斑马鱼给药方式有多种：水溶给药，药物直接溶解在养鱼水中，通过肠道、鳃和皮肤渗透等方式被斑马鱼吸收；也可以通过显微注射，直接注射到斑马鱼卵黄囊（肌肉）、血液循环或者腹腔（成鱼）；部分药物开可以采用插管灌胃方式给药（成鱼）。利用斑马鱼早期通体透明，在光学显微镜下直接进行组织器官水平的观察，通过斑马鱼整体图像分析技术，可以从肝脏荧光强度、肝脏面积大小、卵黄囊吸收延迟、测定斑马鱼体内丙氨酸氨基转移酶(ALT) ，天门冬氨酸氨基转移酶(AST) ，谷胱甘肽(GSH) 的活力和总胆红素( TBIL) 的含量，同时分别对其进行肝脏切片分析，观察斑马鱼肝脏组织病理学改变，可以用于中药肝毒性实验的研究。因此本实验采用斑马鱼幼鱼为肝脏毒性评价模型，对何首乌和大黄中蒽醌类成分进行探索研究，从而为何首乌和大黄肝毒性的研究奠定基础。
- 拟研究或解决的问题
何首乌的肝毒性在药物性肝损伤中居首位。目前观点认为何首乌中的肝毒性成分为蒽醌类。大黄中含有大量蒽醌，肝毒性却不常报道。本实验通过对何首乌和大黄中的蒽醌类成分进行定量分析，后以相同的蒽醌量分别换算到大黄和何首乌的生药材量给药斑马鱼，通过观察斑马鱼的肝损伤的相关性指标来比较大黄和何首乌的肝毒性大小。
- 研究手段和方法
通过查阅相关文献，了解何首乌和大黄的提取分离，定量分析方法，斑马鱼的中药给药方式，斑马鱼肝损伤相关性指标设计实验内容并进行测定。
1.药材：大黄，何首乌
2.含量测定：
