一.研究背景、意义和目的
阿尔茨海默病为发病率最高的神经退行性疾病,目前尚无理想治疗药物。天麻为我国名贵中药,具有熄风平惊、镇静安眠、益智之功效, 临床和试验均发现天麻对阿尔茨海默病具有治疗作用,但其有效物质基础尚未明确。本课题将基于中国医学科学院药物研究所植物化学室分离得到的天麻物质成分,利用冈田酸制备Tau蛋白过度磷酸化模型,在此基础上,探寻天麻治疗阿尔茨海默病病变的物质基础,为天麻用于阿尔茨海默病的治疗提供理论基础和科学依据。
二.研究主要内容
1.AD细胞模型的建立---冈田酸(OKA)诱导的PC12细胞损伤
1.1 细胞培养:
实验所用PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞,模拟神经元)在DMEM基质中培养,其中含灭活胎牛血清和马血清各5%(v/v),100U/ml青霉素,100mu;g/ml链霉素,于37℃,5% CO2、饱和湿度、无菌条件下培养。细胞呈对数增长时,进行细胞传代,调整细胞密度。约5104个/ml,每孔100mu;l接种在96孔板。
1.2 冈田酸造模:
用DMEM 完全培养基将OKA 母液( DMSO 配制,浓度为30mu;mol/L)稀释成30nmol/L后与细胞共孵育36h。
2.细胞活性检测
2.1 MTT法检测细胞生存率
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