丹参毛状根遗传转化体系的建立一、课题解决的问题丹参(SalviamiltiorrhizaBunge)为唇形科多年生草本植物，是我国的传统中草药之一,以其根及根茎入药,可广泛用于心血管系统和血液系统疾病的治疗。
随着丹参市场的扩大,其需求量剧增,野生丹参资源已远远不能满足市场的需求,加之丹参有效成分在原植物中含量低且生长周期长,在传统的栽培模式下又面临着质量参差不齐、品质退化严重等问题,因此,有必要应用植物细胞工程和基因工程等现代生物工程技术,改良丹参品质,在保证丹参药材质量稳定性和优良性的前提下,提高丹参有效成分含量。
本课题选用江苏丹参及河南丹参两个品种，以发根农杆菌C58C1作为转化细菌，在已有优化体系基础上，对两个不同道地产区的丹参品种进行遗传转化研究，培养出丹参酮高含量的毛状根，为进一步工业化生产打下坚实的基础。
二、研究方法和技术路线（一）无菌苗的获得：取饱满的丹参种子，用自来水浸泡2h，然后用纱布除去其表面的粘层。
75％乙醇浸30s，无菌水冲洗1次，10％次氯酸钠浸泡20分钟，再用无菌水冲洗5次。
用无菌吸水纸吸干种子表面的水，接种于MS固体培养基上（含激素Amp），暗培养15天左右，待种子萌发后，转入新鲜的MS固体培养基上壮苗，每天光照12h。
长出的无菌苗一部分直接用于转化，另一部分在MS（加NAA,6-BA，用于生芽）或1/2MS（不加激素，用于生根）培养基上扩繁得到更多的无菌苗。
(二)菌种的获得与活化：无菌条件下，用接种针挑取保存的含空载体pHB sGFP的发根农杆菌C58C1菌液，于含在添加卡拉霉素（100mg/L）、利福平（100mg/L）和链霉素（40mg/L）的固体LB培养基上划线培养并保存。
在平板上挑取单斑接种于10mL添加含以上抗生素的LB液体培养基中，200rpm，28℃振荡培养两三天，菌液浓度OD600值为0.4-0.8之间。
