开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、拟解决的问题
Lunasin(分子量为5kDa) 是一个广泛存在于大豆植物种子、大麦等多种谷物及中草药种子中的一种含有43个氨基酸的多肽。Lunasin羧基末端包含8个天冬氨酸(Asp)残基可与染色体结合,此结构与多肽的抗有丝分裂效应相关,可以结合到去乙酰化的染色质区(如,着丝粒),导致有丝分裂中止而最终引起细胞死亡。研究发现Lunasin具有抑制结肠癌、乳腺癌和前列腺癌的功能。
本课题是对本实验室采用融合表达的方法获得的重组Lunasin进行细胞水平上的抗癌活性研究,鉴定重组Lunasin抗肿瘤促细胞凋亡的生物活性功能。该重组Lunasin是以水蛭素为融合伴侣,进行融合表达并酶切后的产物,其结构与天然Lunasin一致。Trcine/SDS-PAGE结果显示制得的Lunasin分子量为5kDa左右,MALDI-TOF/TOF质谱分析结果显示其分子量为5027.6029,与理论值一致。
二、研究手段
1、培养人结肠癌细胞株HCT-116﹑人乳腺癌细胞株MDA-MB-231及人肝癌细胞株HepG2作为实验细胞,选用恰当的培养方法,实验细胞应保持较好的状态。
2、通过MTT法检测重组Lunasin对以上细胞增殖的影响。
3、通过Hoechst 33342/碘化丙啶荧光双染法观察对以上细胞形态的影响。
4、根据实验结果分析重组Lunasin的抗肿瘤粗细胞凋亡的作用。
三、文献综述
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