肝癌中载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽自我修饰位点的鉴定和与其相互作用蛋白的发现文献综述

 2022-12-04 04:12

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、拟研究的问题

APOBEC家族共有十几个成员,均含有发挥催化作用的锌依赖性催化区(ZDD区),其核心作用为突变RNA或DNA上的胞嘧啶为尿嘧啶,导致该序列翻译产生的蛋白质结构和功能改变。APOBEC在人体内有12个亚型,A3又分为A3A~A3H;而在小鼠体内仅有4个亚型,其中APOBEC3(mA3)与人体A3B的同源性最高,且在功能上有高度相似性。

载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(APOBEC3B)是一类可以编辑RNA或DNA的蛋白,能够将胞嘧啶突变为尿嘧啶,并在肝脏脂类运输、抗体多样性修饰、抗逆转录病毒等多方面发挥重要生理作用。近几年大量报道发现,APOBEC家族成员在乳腺癌、宫颈癌、肺癌、肝癌等多种肿瘤组织中高表达,并能引起大量体细胞突变。而A3B是该家族中唯一稳定表达于细胞核中的成员,它与宿主细胞基因组接触和结合的机会均高于其它成员。随着研究不断深入,APOBEC家族与肿瘤的相关性在近几年开始被揭示,A3B在乳腺癌、宫颈癌等多种肿瘤中普遍表达增加,且与抑癌基因突变、基因组总突变率有密切关系。

因此,对A3B抑制剂的研究有望可以改善肿瘤细胞微环境,进而为肿瘤治疗奠定基础。但是,纯化A3B蛋白一直难以获得,制约了A3B抑制剂的研发。本课题旨在获得纯化的A3B蛋白,为A3B抑制剂的研发奠定基础。

二、研究目标、采用的手段

 研究目标:探索A3B全蛋白纯化的方法

 研究手段:lt;1gt;质粒构建: (1)目的基因的扩增 (2)酶切连接

(3)测序验证 (4)转化

lt;2gt;蛋白表达: 转染293T细胞(24 hour)

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