开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、研究背景
宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,威胁着全球女性的生命与健康安全。宫颈癌的发病机制复杂,包含多方面因素的影响与作用,其中较为明确的生理学因素是人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染。
HPV是一种双链环状DNA病毒,属于乳头瘤病毒科乳头瘤病毒A属。HPV可根据感染人体后产生的影响及临床症状的差异,可分为皮肤型和黏膜型[[1]];根据致癌风险的高低可分为低危型和高危型两大类,低危型包括包括 HPV 6、11、40、42、43、44、61、70、72和81,它们可引起低度病变,例如尖锐湿疣和良性宫颈病变,在恶性肿瘤中很少见;高危HPV包括 HPV 16、、 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和66,是引起宫颈癌的主要病因[[2]][[3]],因此对HPV进行分型检测在宫颈癌早期筛查中存在重要意义。
目前临床上常用的HPV的检测方法有基于病理学的传统方法和基于分子生物学的新型方法。传统的检测方法简便、直观,主要包括巴氏涂片细胞学检测、阴道镜检查、宫颈活检组织病理学检查等,但存在较高的假阴性率和假阳性率,且不便于对患者感染的HPV 进行分型;
目前常见的分子生物学的检测方法主要有下列几类:(1)经典核酸杂交检测方法,包括Southern印迹杂交、原位杂交、斑点印迹杂交;(2)信号放大技术检测方法,包括二代杂交捕获技术(Hybrid Capture 2,HC-2)、cervista HPV HR检测和cervista HPV 16/18检测试剂盒;(3)核酸扩增及衍生技术检测方法,包括基因芯片技术、实时荧光定量PCR及衍生技术、巢式PCR、聚合酶链反应-限制性酶切片段多态性 (polymerase chain reaction-restricted fragment length pol-ymorphisms, PCR-RFLP)、线阵检测法 (linear array, LA)、APTIMA HPV检测技术、n sequencing, NGS) 、 Xpert HPV检测等[[4]]。这些方法在具备各自优点的同时都存在着不足之处,包括:检测特异性低、易出现假阳性检测结果、无法区分感染HPV的具体亚型或能指示出的亚型数目有限、检测成本高、操作繁琐等。
针对以上这些不足,本研究课题拟采用PCR偶联核酸侵入反应及纳米金显色技术建立起一种针对HPV的新的检测方法,实现对HPV的高特异性、低成本的可视化分型检测。
二、研究方法
本研究课题拟采用PCR偶联核酸侵入反应及纳米金显色技术建立一种针对HPV的检测新方法。
检测反应整体共分为3个阶段, 首先进行多重PCR扩增, 实现对目标模板的扩增;接着采用核酸侵入反应[[5]][[6]]进行核酸侵入信号放大,将目标模板的检测转化为信号分子的检测,并实现检测信号放大;最后进行纳米金探针杂交反应实现结果的可视化判读。
