开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究背景
灰葡萄孢菌(BoLrytis cinerea Pers.)是灰霉病的病原菌，能够侵染植物的根茎、叶片、花和果实，导致植物减产，甚至绝收。在作物采摘后的贮藏和运输过程中，灰葡萄孢菌会加速果蔬腐烂变质，导致严重的物流损失。灰葡萄孢菌是一种适宜在低温、高湿环境下生长的植物病原菌。在农业生产中，温室内温度通常保持在15 -20℃，具有较高的相对湿度，极易引起灰霉病大范围的发生。在作物采摘后的贮藏和运输过程中，灰葡萄孢菌会加速其腐烂变质，导致严重的物流损失（肖景惠等，2019）。目前，灰葡萄孢菌的防治手段以施加化学杀菌剂为主，虽可高效抑制病害，但也易产生抗药性，长此以往削弱了防治效果，且化学防治手段不利于环境保护，残留药物会危害人畜健康。因此我们希望通过研发生物药物从而针对以上问题。与传统化学农药相比，生物农药具有对人畜安全、环境兼容性好、毒性低、不易产生抗性、易于保护生物多样性和来源广泛等众多优点，因此高效生物农药的开发应用对人类健康、环境保护和农业可持续发展都具有重要意义（方献平等，2019）。
项目前期研究发现植物源化合物DK对其具有较强的抑制作用，是一种潜在的防治药剂。但是作用机制尚不明确。因此非常有必要进行化合物的作用机制研究，为该化合物及其类似物的科学开发利用及结构优化提供理论依据。化合物DK的结构类似物已证明为钙拮抗剂，结构相似的化合物一般具有相似的活性，故我们推测其抑菌作用机制可能与Ca2 相关。
二、拟研究或解决的问题
1.研究化合物DK处理灰葡萄孢菌后菌丝及孢子内Ca2 含量的变化；
2.研究化合物DK处理灰葡萄孢菌后Ca2 /CN通路中钙调磷酸酶、Na -K -ATP酶和磷脂酶活性的影响和Ca2 /CN信号通路Ca2 通道蛋白（cch1,mid1）、钙调磷酸BcCN和钙泵蛋白（Pmc1,Pmr1）表达量的影响。
三、研究手段及文献综述
- 细胞内游离钙离子测定方法
植物受到刺激时，胞质游离钙离子浓度升高，其来源有两个:一是通过质膜钙通道的胞外基质中Ca2 的流入，二是胞内钙库中钙离子的释放。测定胞质中Ca2 对评价其在外界刺激传导至胞内中所起的作用非常重要(孙清鹏等，2010)。
钙离子测定方法有物理方法和荧光测定法。物理方法如:原子吸收光谱法，X射线微区分析技术，离子选择性微电极技术，核磁共振波谱技术，同位素示踪技术等。但这些方法有的会杀死细胞，有的不能区分游离Ca2 和结合Ca2 ，有的操作复杂极易损伤细胞。总之，均难以在不干扰细胞正常代谢的情况下定量分析生活细胞内游离Ca2 的浓度及其变化。
