thTERT重组慢病毒载体的构建及病毒包装文献综述

 2023-02-14 07:02

一、课题的研究背景、意义和目的正常细胞因其增殖能力有限,故在实际应用中受到许多限制。

在实际研究中,理想细胞为具有正常持续繁殖能力的细胞,即永生化细胞。

因此,获得永生化细胞,对于基础研究、临床应用和工程领域皆有深远的影响。

常见的细胞永生化方法有病毒法、抑癌基因法、放射因素法、原癌基因法和转染端粒酶逆转录酶(TERT)法等。

实验证明,TERT法具有分子机制明确、永生化效率高和细胞稳定性好而应用广泛,且目前已有许多成功的例子,如人成骨细胞永生化、人牙髓干细胞永生化、人皮肤成纤维细胞永生化等均已取得成功,它们都是通过基因转染的方法转染hTERT基因筛选获得了稳定细胞株。

近年来,人端粒酶逆转录酶较多应用于细胞永生化,且实验证明,永生化细胞能够保持原代细胞的生态学和形态学特征,具有正常的生长速率和核型,且无致瘤性,可用于深入的科学研究。

Th17细胞是一类主要产生IL-17的Th细胞亚群,与许多炎症反应和自身免疫性疾病的发生和发展有关,是目前研究热点之一。

但是Th17细胞在体外存活时间短,严重限制对其进行深入的研究。

因此,建立Th17细胞永生化细胞系具有很大的科研意义。

本课题通过构建含截短的编码人端粒酶逆转录酶基因的慢病毒过表达载体,与慢病毒包装质粒和包膜质粒共同转染至293T细胞,包装形成完整的慢病毒颗粒,并用qRT-PCR法测定其滴度。

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