课题的目的:筛选高表达GFP的A549细胞系并进行检测研究内容:将pmax GFP质粒转导进感受态细菌中,大量扩增细菌,提取质粒并检测其浓度。
使用Lipo试剂,让质粒转染体外培养的A549细胞,以获得表达GFP的A549,检测转染效果第一~二周:查阅文献,确定课题,撰写开题报告,准备实验材料。
第三~四周:转化DH5alpha;,大量培养并提取目的质粒。
第五~七周:抗生素筛选目的细胞。
第八~十周:使用3种方法检测转染效率。
第十一周:完成论文。
一、选题意义质粒是存在于细胞染色体外的一个或多个能独立复制并稳定遗传的小型环状双链DNA分子,其分子量一般在0.2~10kD范围内。
由于质粒分子小,便于分离和提取,可以携带目的基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达,基因克隆实验中常将经改造后的质粒作为运送基因的载体。
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)于1962年从水母中分离,该蛋白在紫外光或蓝光激发下发荧光。
GFP在无任何底物和辅助因子情况下,也能在活细胞内发荧光,可用于标记细胞和蛋白质。
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